| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述：苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒的研究进展 | 第11-27页 |
| ·梨树潜隐病毒的理化性质及其发生与危害 | 第11-13页 |
| ·ACLSV和ASGV生物学特性 | 第11-12页 |
| ·ACLSV和ASGV分布及其危害 | 第12-13页 |
| ·梨组培脱毒技术研究 | 第13-19页 |
| ·梨潜隐病毒脱除技术 | 第14-17页 |
| ·热处理脱病毒 | 第14页 |
| ·茎尖培养脱病毒 | 第14-15页 |
| ·热处理与茎尖培养相结合脱病毒 | 第15-16页 |
| ·化学处理脱病毒 | 第16-17页 |
| ·脱毒苗的组培快繁技术 | 第17-19页 |
| ·梨组培研究与应用进展 | 第18-19页 |
| ·生根培养及试管苗移栽 | 第19页 |
| ·果树脱毒效果的检测技术 | 第19-24页 |
| ·木本指示植物鉴定 | 第20页 |
| ·血清学检测 | 第20-22页 |
| ·分子生物学检测 | 第22-24页 |
| ·反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术 | 第22-23页 |
| ·核酸杂交技术 | 第23-24页 |
| ·病毒在寄主中的定位分布检测 | 第24-26页 |
| ·研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 砂梨ACLSV和ASGV检测技术的建立 | 第27-47页 |
| ·试验材料 | 第27-29页 |
| ·待检砂梨样品 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·质粒、菌株 | 第28页 |
| ·RT-PCR引物的设计及合成引物 | 第28-29页 |
| ·试验方法 | 第29-36页 |
| ·PAS-ELISA(Protein A sandwich ELISA)检测 | 第29页 |
| ·组织免疫印迹法(Direct Tissue blot immunoassay,DTBIA) | 第29-30页 |
| ·试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR) | 第30-32页 |
| ·PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第33页 |
| ·质粒DNA酶切 | 第33-34页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第34页 |
| ·核酸探针的标记 | 第34-35页 |
| ·生物素标记探针的效价测定 | 第35页 |
| ·斑点杂交(dot-blot hybridization) | 第35页 |
| ·组织印迹杂交 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-45页 |
| ·砂梨离体植株上带毒状况的测定 | 第36-38页 |
| ·砂梨离体植株上带毒状况的PAS-ELISA检测结果 | 第36-37页 |
| ·砂梨离体植株上带毒状况的TC-RT-PCR检测结果 | 第37-38页 |
| ·组织免疫印迹法检测病毒在砂梨离体植株茎尖的分布状况 | 第38-40页 |
| ·核酸杂交检测体系的建立 | 第40-45页 |
| ·ACLSV和ASGV探针标记及其活性的测定 | 第40-41页 |
| ·斑点杂交的灵敏度 | 第41-42页 |
| ·斑点杂交检测砂梨离体植株ASGV和ACLSV | 第42-43页 |
| ·组织印迹杂交检测ASGV和ACLSV | 第43-45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 物理和化学处理对病毒在砂梨离体植株内时空分布的影响 | 第47-64页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·脱病毒处理砂梨样品 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47-49页 |
| ·热处理 | 第47-48页 |
| ·试管苗准备 | 第47-48页 |
| ·恒温热处理 | 第48页 |
| ·变温热处理 | 第48页 |
| ·化学处理 | 第48页 |
| ·病毒醚(25μg／mL)不同时间处理丰水离体植株 | 第48页 |
| ·组织印迹 | 第48页 |
| ·病毒检测 | 第48-49页 |
| ·再生植株病毒检测 | 第48页 |
| ·组织印迹病毒的检测 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-62页 |
| ·恒温热处理植株生长状况及对茎尖病毒的影响 | 第49-56页 |
| ·恒温热处理植株生长状况 | 第49页 |
| ·印迹原位杂交法检测恒温热处理不同时间对ACLSV和ASGV在梨离体植株中分布的影响 | 第49-50页 |
| ·恒温热处理对梨离体植株茎尖病毒浓度的影响 | 第50-52页 |
| ·斑点杂交(dot-blot hybridizationl)检测恒温热处理再生植株ACLSV和ASGV | 第52-54页 |
| ·ELISA和dot-blot hybridization检测热处理再生植株ACLSV和ASGV灵敏 度的比较 | 第54-55页 |
| ·恒温热处理结合茎尖培养获得无毒植株脱毒效果 | 第55-56页 |
| ·变温热处理植株生长状况及对茎尖病毒的影响 | 第56-61页 |
| ·变温热处理植株生长状况 | 第56-57页 |
| ·免疫印迹和印迹原位杂交法检测变温热处理不同时间对ACLSV和ASGV在梨离体植株中分布的影响 | 第57-59页 |
| ·斑点杂交检测变温热处理再生植株中ACLSV和ASGV | 第59-60页 |
| ·变温热处理结合茎尖培养获得无毒植株脱毒效果 | 第60-61页 |
| ·化学处理对病毒在离体植株中分布的影响 | 第61-62页 |
| ·结论与讨论 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录A 试验常用溶液配方 | 第72-75页 |
| 附录B 已发表文章或已接受文章 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
