| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·病原及基因组 | 第12-13页 |
| ·流行病学 | 第13-15页 |
| ·临床症状 | 第15页 |
| ·肺结核 | 第15页 |
| ·乳房结核 | 第15页 |
| ·生殖结核 | 第15页 |
| ·肠结核 | 第15页 |
| ·牛结核病的诊断 | 第15-20页 |
| ·结核菌素皮内试验(tuberculin skin test,TST) | 第16页 |
| ·血清学诊断 | 第16-17页 |
| ·对菌体成分的检测 | 第17页 |
| ·淋巴细胞增生实验 | 第17页 |
| ·细胞因子及细胞因子受体检测法 | 第17-19页 |
| ·γ-干扰素(IFN-γ) | 第18页 |
| ·白细胞介素-2(IL-2) | 第18-19页 |
| ·白细胞介素-2受体α肽链(IL-2R-α) | 第19页 |
| ·聚合酶链反应(PCR技术) | 第19页 |
| ·核酸探针技术 | 第19-20页 |
| ·结核杆菌特异性诊断抗原的研究 | 第20-21页 |
| ·结核病疫苗研究 | 第21-24页 |
| ·传统BCG疫苗 | 第21-22页 |
| ·蛋白质亚单位疫苗 | 第22页 |
| ·DNA疫苗 | 第22-23页 |
| ·重组BCG和新型减毒活疫苗 | 第23页 |
| ·以非致病性分枝杆菌为载体的重组疫苗 | 第23-24页 |
| ·结核病的耐药机理 | 第24页 |
| ·免疫预防 | 第24-25页 |
| ·结核病潜在的公共卫生意义 | 第25页 |
| ·小结 | 第25-27页 |
| 第2章 研究目的意义 | 第27-29页 |
| 第3章 材料与方法 | 第29-46页 |
| ·试验材料 | 第29-33页 |
| ·质粒及菌株 | 第29页 |
| ·主要药品及试剂 | 第29页 |
| ·抗生素的配制 | 第29-30页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第30页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂的配制 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制 | 第30-31页 |
| ·Western blot缓冲液的配制 | 第31页 |
| ·其它试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第32页 |
| ·乳胶试剂 | 第32页 |
| ·实验血清 | 第32页 |
| ·乳胶凝集(LAT)缓冲液的配制 | 第32-33页 |
| ·mpb70基因克隆表达方法 | 第33-39页 |
| ·PCR扩增目的基因片断 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR产物连接到pMD18-T载体 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第34页 |
| ·质粒的转化 | 第34页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第34-35页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第35-36页 |
| ·mpb70-pMD18-T的酶切处理和纯化 | 第36页 |
| ·pET-28a载体制备(质粒DNA的小量制备) | 第36页 |
| ·构建重组表达载体 | 第36页 |
| ·转化子的鉴定 | 第36-37页 |
| ·PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·限制性内切酶鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定 | 第37页 |
| ·pET28a-mpb70质粒的制备 | 第37页 |
| ·把pET28a-mpb70质粒转化入大肠杆菌BL21 | 第37页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·最佳的诱导表达条件的确定 | 第37页 |
| ·小量诱导 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第38-39页 |
| ·包涵体的提取 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE | 第38-39页 |
| ·Western-blot | 第39页 |
| ·乳胶凝集诊断方法的建立 | 第39-46页 |
| ·乳胶类型的选择 | 第39-40页 |
| ·最佳偶联MPB70蛋白量的确定 | 第40页 |
| ·最佳偶联时间的选择 | 第40-41页 |
| ·最佳胶乳浓度的确定 | 第41页 |
| ·偶联反应终止剂的选择 | 第41-42页 |
| ·封闭剂的选择 | 第42页 |
| ·检测方法及结果判定 | 第42页 |
| ·LAT的特异性和敏感性试验 | 第42-43页 |
| ·特异性试验 | 第42-43页 |
| ·敏感性试验 | 第43页 |
| ·重复性试验 | 第43-46页 |
| ·批内重复 | 第43-44页 |
| ·批间重复 | 第44-46页 |
| 第四章 结果与分析 | 第46-56页 |
| ·基因克隆表达结果 | 第46-49页 |
| ·牛型结核分枝杆菌mpb70基因扩增结果 | 第46页 |
| ·重组载体的构建 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·pET28a-mpb70酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·序列测定与分析 | 第48页 |
| ·重组菌菌体裂解物的SDS-PAGE电泳结果 | 第48页 |
| ·Western blot结果 | 第48-49页 |
| ·临床实验结果 | 第49-53页 |
| ·武汉奶牛场A的70头奶牛跟踪检测结果 | 第49-51页 |
| ·武汉市奶牛场B的61头奶牛检测结果 | 第51-53页 |
| ·临床实验结果分析 | 第53-56页 |
| ·武汉市奶牛场A检测结果统计分析 | 第53-54页 |
| ·武汉市奶牛场B检测结果统计分析 | 第54-56页 |
| 第5章 讨论 | 第56-61页 |
| ·细菌裂解和包涵体的提取 | 第56页 |
| ·包涵体的溶解及复性 | 第56页 |
| ·MPB70蛋白 | 第56-57页 |
| ·羧化乳胶的优点 | 第57页 |
| ·乳胶凝集方法的条件优化 | 第57-58页 |
| ·临床实验结果的分析 | 第58-59页 |
| ·本方法的应用前景 | 第59-61页 |
| 第6章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 在读期间发表文章 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第69页 |
