| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 前言 | 第10页 |
| 2 植物中的转录后基因沉默(PTGS) | 第10-12页 |
| 3 RNA沉默的机制 | 第12-14页 |
| ·dsRNA对RNA沉默机制的启动 | 第13-14页 |
| ·dsRNA降解成21-23nt RNA | 第14页 |
| ·21-23nt RNA是RNA沉默的特异性决定因子 | 第14页 |
| 4 利用RNA沉默防治植物病毒病研究进展 | 第14-16页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 CMV MP基因反向重复原核载体的构建 | 第17-25页 |
| 1 材料 | 第17页 |
| ·菌种、质粒 | 第17页 |
| ·酶、化学试剂 | 第17页 |
| ·抗生素 | 第17页 |
| 2.方法 | 第17-22页 |
| ·质粒的提取 | 第17-19页 |
| ·煮沸法少量提取质粒 | 第17页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第17-18页 |
| ·CTAB法提取质粒 | 第18页 |
| ·试剂盒提取质粒 | 第18-19页 |
| ·质粒的纯化与浓缩 | 第19页 |
| ·DNA的酶切体系 | 第19页 |
| ·DNA的割胶回收 | 第19-20页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第20页 |
| ·酶切片段与载体的连接 | 第20页 |
| ·感受态细胞制备方法 | 第20-21页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第21页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-24页 |
| ·构建策略 | 第22-23页 |
| ·目的基因的获得 | 第23页 |
| ·MP基因的引物设计与合成 | 第23页 |
| ·PCR扩增MP基因和CP基因 | 第23页 |
| ·MP基因反向重复原核表达载体的获得 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 黄瓜花叶病毒病(CMV)反向重复MP基因植物表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| ·菌种、质粒 | 第25页 |
| ·酶、化学试剂 | 第25页 |
| ·抗生素 | 第25页 |
| 2 CMV反向重复MP基因植物表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第25页 |
| ·反向重复植物表达载体导入农杆菌(三亲交配法) | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26页 |
| ·MP基因反向重复植物表达载体的获得 | 第26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| ·反向重复植物表达载体构建策略 | 第27页 |
| ·前景和意义 | 第27-28页 |
| 第四章 转基因烟草的获得和室内攻毒实验 | 第28-37页 |
| 1.材料 | 第28页 |
| ·供试植物 | 第28页 |
| ·供试质粒 | 第28页 |
| ·毒源 | 第28页 |
| ·抗血清 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| ·农杆菌的培养 | 第28页 |
| ·烟草叶片的准备 | 第28页 |
| ·预培养 | 第28-29页 |
| ·农杆菌侵染 | 第29页 |
| ·共培养、筛选培养、继代培养 | 第29页 |
| ·生根培养 | 第29页 |
| ·土壤种植 | 第29页 |
| ·转基因烟草的分子生物学鉴定 | 第29-32页 |
| ·PCR检测 | 第29-30页 |
| ·烟草基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30页 |
| ·转基因烟草植株的Southern blot分析 | 第30-32页 |
| ·电泳及转膜 | 第30-31页 |
| ·探针的制备 | 第31页 |
| ·杂交 | 第31-32页 |
| ·病毒接种 | 第32页 |
| ·DAS-ELISA测定 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·反向重复MP基因的烟草转化和卡那抗性植株的获得 | 第32-34页 |
| ·转基因烟草的分子生物学定 | 第34-35页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第34页 |
| ·转基因烟草的Southern blot印迹杂交析 | 第34-35页 |
| ·烟草攻毒试验 | 第35页 |
| 4.讨论 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 附录A 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第42-43页 |
| 附录B 常用的抗生素及使用浓度 | 第43-44页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 个人简介 | 第51页 |
