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高产与低产蛋鸡产蛋高峰期卵巢组织基因差异表达的研究

缩略词表第1-9页
中文摘要第9-11页
ABSTRACT第11-13页
1. 引言第13-23页
   ·分子生物学技术在蛋鸡育种中的应用现状第13-15页
   ·影响鸡繁殖性状候选基因的研究进展第15-18页
     ·促卵泡素受体基因第16页
     ·催乳素受体基因第16-18页
   ·研究表达量差异的基因克隆技术第18-21页
     ·mRNA 差异显示(DDRT-PCR)第18-19页
     ·差减杂交(SH)与抑制性消减杂交(SSH)第19页
     ·基因表达系列分析(SAGE)第19-20页
     ·cDNA-AFLP 技术第20页
     ·LPCR 技术第20-21页
   ·本研究的目的意义第21-22页
   ·本研究的技术路线第22-23页
2. 材料与方法第23-39页
   ·实验材料第23-24页
     ·菌株第23页
     ·实验材料第23页
     ·主要仪器、设备第23页
     ·主要试剂及来源第23-24页
   ·溶液及试剂配制第24-29页
     ·常规溶液及试剂第24页
     ·提取总RNA 的主要试剂第24页
     ·反转录的主要试剂第24-25页
     ·DDRT-PCR 的主要试剂第25页
     ·4%非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳及银染的主要试剂第25-26页
     ·差异片段的回收的主要试剂第26页
     ·差异片段的连接、转化与克隆的主要试剂第26-27页
     ·重组质粒鉴定与提取的主要试剂第27页
     ·差异片段的反向Northern 杂交验证的主要试剂第27-28页
     ·候选基因特异性扩增的主要试剂第28-29页
   ·DDRT-PCR 的实验方法与步骤第29-37页
     ·总RNA 的提取、纯化与质量检测第29-30页
     ·反转录第30页
     ·DDRT-PCR第30-31页
     ·非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳及银染第31-32页
     ·差异片段的第一次回收第32-33页
     ·第一次回收片段的二次PCR 扩增第33页
     ·二次PCR 产物的回收第33页
     ·差异片段与pMD18-T 载体的连接第33-34页
     ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaC12 法)第34页
     ·转化第34页
     ·重组质粒DNA 的鉴定与提取第34-35页
     ·差异片段的反向Northern 杂交验证第35-37页
   ·候选基因(FSHR 和PRLR)的差异显示第37-39页
     ·持家基因的DDRT-PCR第37-38页
     ·候选基因(FSHR 和PRLR)的DDRT-PCR第38-39页
3. 结果与分析第39-51页
   ·高产与低产鸡群主要屠体及蛋品质性状最小二乘均数及标准误第39-40页
   ·总RNA 的提取与检测第40-41页
   ·mRNA 差异显示结果第41-43页
   ·差异表达片段的反Northern dot blot 鉴定及克隆、测序第43-49页
     ·差异表达片段的回收和二次PCR 扩增第43-44页
     ·差异表达片段的克隆与验证第44-49页
   ·功能基因的差异显示结果第49-51页
     ·持家基因的DDRT-PCR 结果第49-50页
     ·功能基因的DDRT-PCR 结果第50-51页
4. 讨论与结论第51-56页
   ·讨论第51-54页
     ·mRNA 差异显示技术的条件优化与假阳性带的剔除第51-52页
     ·高产与低产蛋鸡卵巢组织基因差异表达结果分析第52页
     ·H-AP5、H-P5、H-P4 的鉴定和序列分析第52页
     ·HoxDb、HoxCa、HoxBa 基因簇功能分析第52-53页
     ·FSHR 和PRLR 在高产与低产鸡卵巢组织中的DDRT-PCR 检测第53-54页
   ·结论第54-56页
     ·差异显示及引物筛选结果第54页
     ·高产与低产蛋鸡卵巢组织存在五种基因差异表达模式第54页
     ·高产与低产蛋鸡群之间的生产性能分析结果第54-55页
     ·蛋鸡32 周龄卵巢组织的差异表达片段功能预测第55页
     ·候选基因FSHR 和PRLR 在高产与低产鸡卵巢组织中的检测结果第55页
     ·对DDRT-PCR 技术的优化结果第55-56页
参考文献第56-67页
附录第67-70页
致谢第70-71页
作者简介第71页

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