缩略词表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
1. 引言 | 第13-23页 |
·分子生物学技术在蛋鸡育种中的应用现状 | 第13-15页 |
·影响鸡繁殖性状候选基因的研究进展 | 第15-18页 |
·促卵泡素受体基因 | 第16页 |
·催乳素受体基因 | 第16-18页 |
·研究表达量差异的基因克隆技术 | 第18-21页 |
·mRNA 差异显示(DDRT-PCR) | 第18-19页 |
·差减杂交(SH)与抑制性消减杂交(SSH) | 第19页 |
·基因表达系列分析(SAGE) | 第19-20页 |
·cDNA-AFLP 技术 | 第20页 |
·LPCR 技术 | 第20-21页 |
·本研究的目的意义 | 第21-22页 |
·本研究的技术路线 | 第22-23页 |
2. 材料与方法 | 第23-39页 |
·实验材料 | 第23-24页 |
·菌株 | 第23页 |
·实验材料 | 第23页 |
·主要仪器、设备 | 第23页 |
·主要试剂及来源 | 第23-24页 |
·溶液及试剂配制 | 第24-29页 |
·常规溶液及试剂 | 第24页 |
·提取总RNA 的主要试剂 | 第24页 |
·反转录的主要试剂 | 第24-25页 |
·DDRT-PCR 的主要试剂 | 第25页 |
·4%非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳及银染的主要试剂 | 第25-26页 |
·差异片段的回收的主要试剂 | 第26页 |
·差异片段的连接、转化与克隆的主要试剂 | 第26-27页 |
·重组质粒鉴定与提取的主要试剂 | 第27页 |
·差异片段的反向Northern 杂交验证的主要试剂 | 第27-28页 |
·候选基因特异性扩增的主要试剂 | 第28-29页 |
·DDRT-PCR 的实验方法与步骤 | 第29-37页 |
·总RNA 的提取、纯化与质量检测 | 第29-30页 |
·反转录 | 第30页 |
·DDRT-PCR | 第30-31页 |
·非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳及银染 | 第31-32页 |
·差异片段的第一次回收 | 第32-33页 |
·第一次回收片段的二次PCR 扩增 | 第33页 |
·二次PCR 产物的回收 | 第33页 |
·差异片段与pMD18-T 载体的连接 | 第33-34页 |
·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaC12 法) | 第34页 |
·转化 | 第34页 |
·重组质粒DNA 的鉴定与提取 | 第34-35页 |
·差异片段的反向Northern 杂交验证 | 第35-37页 |
·候选基因(FSHR 和PRLR)的差异显示 | 第37-39页 |
·持家基因的DDRT-PCR | 第37-38页 |
·候选基因(FSHR 和PRLR)的DDRT-PCR | 第38-39页 |
3. 结果与分析 | 第39-51页 |
·高产与低产鸡群主要屠体及蛋品质性状最小二乘均数及标准误 | 第39-40页 |
·总RNA 的提取与检测 | 第40-41页 |
·mRNA 差异显示结果 | 第41-43页 |
·差异表达片段的反Northern dot blot 鉴定及克隆、测序 | 第43-49页 |
·差异表达片段的回收和二次PCR 扩增 | 第43-44页 |
·差异表达片段的克隆与验证 | 第44-49页 |
·功能基因的差异显示结果 | 第49-51页 |
·持家基因的DDRT-PCR 结果 | 第49-50页 |
·功能基因的DDRT-PCR 结果 | 第50-51页 |
4. 讨论与结论 | 第51-56页 |
·讨论 | 第51-54页 |
·mRNA 差异显示技术的条件优化与假阳性带的剔除 | 第51-52页 |
·高产与低产蛋鸡卵巢组织基因差异表达结果分析 | 第52页 |
·H-AP5、H-P5、H-P4 的鉴定和序列分析 | 第52页 |
·HoxDb、HoxCa、HoxBa 基因簇功能分析 | 第52-53页 |
·FSHR 和PRLR 在高产与低产鸡卵巢组织中的DDRT-PCR 检测 | 第53-54页 |
·结论 | 第54-56页 |
·差异显示及引物筛选结果 | 第54页 |
·高产与低产蛋鸡卵巢组织存在五种基因差异表达模式 | 第54页 |
·高产与低产蛋鸡群之间的生产性能分析结果 | 第54-55页 |
·蛋鸡32 周龄卵巢组织的差异表达片段功能预测 | 第55页 |
·候选基因FSHR 和PRLR 在高产与低产鸡卵巢组织中的检测结果 | 第55页 |
·对DDRT-PCR 技术的优化结果 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-67页 |
附录 | 第67-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
作者简介 | 第71页 |