HaSNPV几丁质酶基因原核表达、纯化与复性的研究
| 第一章 文献综述 | 第1-21页 |
| ·几丁质与几丁质酶 | 第8-9页 |
| ·几丁质酶的分类、结构及催化机制 | 第9-12页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第9-10页 |
| ·几丁质酶的结构 | 第10页 |
| ·几丁质酶的催化机制 | 第10-12页 |
| ·几丁质酶产生菌的筛选与酶活测定方法 | 第12-13页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第13-14页 |
| ·几丁质酶在防治植物病原真菌中的应用 | 第13-14页 |
| ·几丁质酶在生物防治中的应用 | 第14页 |
| ·几丁质酶降解产物的应用 | 第14页 |
| ·杆状病毒几丁质酶综述 | 第14-18页 |
| ·杆状病毒简介 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒几丁质酶基因 | 第15-17页 |
| ·杆状病毒几丁质酶的功能 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的、意义、内容和技术路线 | 第18-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| ·本研究的内容 | 第19-20页 |
| ·本研究的技术路线如下 | 第20-21页 |
| 第二章 常用方法和一般操作步骤 | 第21-28页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·试剂配制 | 第21页 |
| ·提取步骤 | 第21-22页 |
| ·酶切 | 第22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳回收 | 第22页 |
| ·T4 DNA-lignase连接 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第22页 |
| ·转化 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增鉴定 | 第23页 |
| ·蛋白质的SDS—PAGE凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·试剂配置 | 第23-24页 |
| ·实验步骤 | 第24页 |
| ·几丁质酶酶活的测定 | 第24-26页 |
| ·试剂配置 | 第25页 |
| ·几丁质酶酶活的测定 | 第25-26页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第26-28页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第26-27页 |
| ·280nm光吸收法测定蛋白浓度 | 第27-28页 |
| 第三章 HaSNPV几丁质酶基因的原核表达 | 第28-38页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·菌株和细胞株 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·pET28a(+)-chiA表达载体构建及鉴定 | 第28-29页 |
| ·(His)_6-chiA的诱导表达及优化 | 第29页 |
| ·(His)_6-chiA酶活的测定 | 第29页 |
| ·pMAL-c2X-chiA表达载体构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·MBP-chiA诱导表达 | 第30页 |
| ·MBP-chiA酶活的测定 | 第30页 |
| ·结果及分析 | 第30-36页 |
| ·pET28a(+)-chiA重组体的构建及表达 | 第30-33页 |
| ·pMAL-c2X-chiA重组体的构建和表达 | 第33-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 (His)_6-chiA蛋白的纯化与复性 | 第38-53页 |
| ·包涵体及蛋白复性的文献综述 | 第38-43页 |
| ·包涵体的性质 | 第38-39页 |
| ·包涵体形成的原因 | 第39-40页 |
| ·包涵体的优势 | 第40页 |
| ·包涵体的分离 | 第40-41页 |
| ·复性 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第44页 |
| ·包涵体的初步纯化及优化 | 第44-45页 |
| ·包涵体变性溶解 | 第45页 |
| ·变性条件下镍柱亲和层析纯化 | 第45页 |
| ·透析复性 | 第45-46页 |
| ·柱上复性 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·包涵体的初步纯化 | 第46-47页 |
| ·包涵体的溶解 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白的镍柱亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| ·透析复性 | 第49页 |
| ·柱上复性 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 附图 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
