| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 第一章 研究进展及本研究目的 | 第17-37页 |
| ·研究进展 | 第17-35页 |
| ·全长cDNA克隆策略 | 第17-23页 |
| ·cDNA文库大量测序技术 | 第17-21页 |
| 1.l.1.2 cDNA末端快速扩增法(RACE) | 第21页 |
| ·硅片克隆 | 第21-22页 |
| ·判断全长cDNA序列的一般标准 | 第22-23页 |
| ·植物功能基因组学研究 | 第23-27页 |
| ·植物表达序列标签 | 第23-24页 |
| ·植物基因功能研究 | 第24-27页 |
| ·基因表达的系统分析((sAGE) | 第24页 |
| ·cDNA芯片与寡核苷酸芯片 | 第24-25页 |
| ·蛋白质组研究 | 第25页 |
| ·应用反向遗传学研究植物基因功能 | 第25-26页 |
| ·生物信息学及其应用 | 第26-27页 |
| ·植物抗病性研究进展 | 第27-34页 |
| ·植物抗病性的表现 | 第27-28页 |
| ·植物抗病的分子机制 | 第28-29页 |
| ·植物抗病性的遗传基础 | 第29-34页 |
| ·植物抗病基因 | 第29-32页 |
| ·植物防卫基因 | 第32-34页 |
| ·葡萄抗白粉病简况 | 第34-35页 |
| ·葡萄白粉病的起源和分布 | 第34页 |
| ·葡萄属植物抗白粉病的分子生物学研究 | 第34-35页 |
| ·研究目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 田间人工接种葡萄白粉病病原菌诱导中国原产华东葡萄“白河-35-1”株系早期叶片cDNA文库构建 | 第37-48页 |
| ·材料与试剂 | 第37-38页 |
| ·材料与处理 | 第37页 |
| ·cDNA文库构建主要试剂 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-45页 |
| ·总RNA的提取与检测 | 第38页 |
| ·总RNA的纯化和检测 | 第38-39页 |
| ·DNA文库构建及检测 | 第39-45页 |
| ·结果 | 第45-46页 |
| ·cDNA文库构建样品总RNA浓度和质量检测结果 | 第45页 |
| ·cDNA的合成 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·构建的cDNA文库的评价 | 第46-47页 |
| ·未扩增cDNA文库的滴度与重组率 | 第47-48页 |
| 第三章 田间人工接种葡萄白粉病原菌诱导中国原产华东葡萄“白河-35-1”株系早期叶片cDNA文库EST序列分析 | 第48-64页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·制备cDNA文库测序平板 | 第48页 |
| ·克隆形式的转换 | 第48页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第48-49页 |
| ·重组质粒Sfi1酶切鉴定及测序 | 第49页 |
| ·EST序列分析方法 | 第49-50页 |
| ·测序结果的初步分析 | 第49-50页 |
| ·Blastn和Blastx分析方法 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-52页 |
| ·转化效率 | 第50-51页 |
| ·序列的产生 | 第51页 |
| ·Blastn的分析结果 | 第51页 |
| ·Blastx的分析结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-64页 |
| ·植物基因功能 | 第52页 |
| ·抗病防卫反应基因作用的研究 | 第52-59页 |
| ·几丁质酶 | 第52-53页 |
| ·细胞色素P450 | 第53-54页 |
| ·多酚氧化酶 | 第54-55页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶和4-香豆酸辅酶A连接酶 | 第55-59页 |
| ·金属硫蛋白 | 第59-60页 |
| ·抗病信号传导途径 | 第60-64页 |
| 第四章 中国原产华东葡萄抗白粉病泛素结合酶蛋白基因全长cDNA序列分析 | 第64-73页 |
| ·材料和方法 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·泛素结合酶基因的克隆和测序方法 | 第65-66页 |
| ·利用NCBI网址中的ORF finder、Blastn和Blastx软件对泛素结合酶基因进行序列分析和同源性比较分析 | 第66页 |
| ·利用简单模块构架搜索工具对泛素结合酶基因所编码的蛋白一级序列进行功能结构域分析 | 第66页 |
| ·利用DNASTAR软件对泛素结合酶基因所编码的蛋白质分子量和等电点以及该蛋白序列多重对齐分析和进化关系的分析 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-71页 |
| ·VpUBC克隆及序列分析 | 第66-68页 |
| ·Blast nr和Blastx分析结果 | 第68页 |
| ·不同生物泛素结合酶氨基酸序列同源性分析和同源性分类分析 | 第68-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·VpUBC蛋白UBCc结构域的功能 | 第71页 |
| ·植物蛋白泛素化与抗病性的关系 | 第71-73页 |
| 第五章 中国原产华东葡萄抗白粉病环化酶基因全长cDNA序列分析及原核表达 | 第73-83页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·cDNA文库材料 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·cDNA片段克隆、测序和分析方法 | 第73页 |
| ·环化酶基因的克隆和测序方法 | 第73页 |
| ·利用NCBI网址中的ORF finder、Blastn和Blastx软件对环化酶基因进行序列分析和同源性比较分析 | 第73页 |
| 5 2.1.3 利用简单模块构架搜索工具环化酶基因所编码的蛋白一级序列进行功能结构域分析 | 第73页 |
| ·利用DNASTAR软件对环化酶基因所编码的蛋白质分子量和等电点分析 | 第73页 |
| ·目的基因的克隆及原核表达 | 第73-76页 |
| ·目的基因cDNA全长序列的PCR扩增 | 第73页 |
| ·目的基因cDNA片段的回收和克隆 | 第73-74页 |
| ·目的基因cDNA片段的回收方法 | 第73页 |
| ·回收片段与克隆载体(pGEM-T-easy)的连接反应方法 | 第73-74页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与连接产物的转化方法 | 第74页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定方法 | 第74页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第74页 |
| ·原核表达载体构建 | 第74-75页 |
| ·目标片段的回收 | 第74页 |
| ·目的基因与pGEX-4T-1载体的连接及转化 | 第74-75页 |
| ·重组原核表达载体酶切鉴定 | 第75页 |
| ·葡萄环化酶基因在大肠杆菌中的诱导融合表达 | 第75-76页 |
| ·结果分析 | 第76-81页 |
| ·VpCyclase克隆及序列分析 | 第76-78页 |
| ·Blastnr和Blastx结果分析 | 第78-79页 |
| ·中国原产华东葡萄环化酶基因的PCR扩增 | 第79页 |
| ·葡萄环化酶基因的克隆和测序 | 第79页 |
| ·葡萄环化酶基因原核表达载体的构建 | 第79-80页 |
| ·葡萄环化酶基因在大肠杆菌中的诱导融和表达 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·葡萄环化酶基因功能的研究 | 第81-82页 |
| ·葡萄环化酶基因的原核表达的研究 | 第82-83页 |
| 第六章 中国原产华东葡萄抗白粉病病程相关蛋白基因全长cDNA序列分析 | 第83-102页 |
| ·材料 | 第84页 |
| ·cDNA文库材料 | 第84页 |
| ·植物材料 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-88页 |
| ·cDNA片段克隆、测序和分析方法 | 第84页 |
| ·病程相关蛋白基因的克隆和测序方法 | 第84页 |
| ·利用NCBI网址中的ORF finder、Blastn和Blastx软件对病程相关蛋白基因进行序列分析和同源性比较分析 | 第84页 |
| ·利用简单模块构架搜索工具对病程相关蛋白基因所编码的蛋白一级序列进行功能结构域分析 | 第84页 |
| ·利用DNASTAR软件对病程相关蛋白基因所编码的蛋白质分子量和等电点以及该蛋白序列多重对齐分析和进化分类分析 | 第84页 |
| ·中国原产华东葡萄株系“白河-35-1”、“广西-1”和毛葡萄株系“泰山-12”基因组DNA片段克隆、测序方法 | 第84-88页 |
| ·葡萄基因组DNA提取方法 | 第84页 |
| ·目的基因DNA全长序列的PCR扩增 | 第84-85页 |
| ·引物的设计与合成 | 第84-85页 |
| ·PCR反应体系 | 第85页 |
| ·PCR扩增程序 | 第85页 |
| ·目的基因DNA片段的回收和克隆 | 第85-88页 |
| ·目的基因 DNA片段的回收 | 第85页 |
| ·回收片段与克隆载体(pGEM-T-easy)的连接反应 | 第85-86页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与连接产物的转化 | 第86-87页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第87页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第87-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-99页 |
| ·VpPR10克隆及序列分析 | 第88-89页 |
| ·同源性比较分析 | 第89-90页 |
| ·葡萄属植物不同种PR10基因的克隆、测序及核酸序列分析 | 第90-95页 |
| ·葡萄属植物不同种PR10基因DNA序列外显子同源性分析 | 第95页 |
| ·葡萄属植物不同种PR10基因推导的氨基酸序列同源性分析 | 第95-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| ·植物VpPR10蛋白BetV1结构域 | 第99-100页 |
| ·植物PR10蛋白功能 | 第100-102页 |
| 第七章 结论 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-121页 |
| 附表3-1 | 第121-127页 |
| 附表3-2 | 第127-130页 |
| 附件1 | 第130-132页 |
| 附件2 | 第132-155页 |
| 英文缩略词 | 第155-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 作者简介 | 第159-160页 |
