| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 缩略词 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-34页 |
| 第一章 乳酸杆菌表达系统的研究状况 | 第18-24页 |
| 1 乳酸杆菌表达载体的优点 | 第18-19页 |
| 2 乳酸杆菌质粒 | 第19页 |
| 3 乳酸杆菌质粒的选择性标记 | 第19-21页 |
| 4 乳酸杆菌基因工程菌的应用 | 第21-23页 |
| 5 面临的挑战 | 第23-24页 |
| 第二章 鹅细小病毒结构蛋白的研究现状 | 第24-28页 |
| 1 结构蛋白的分子生物学特征 | 第24-26页 |
| 2 结构蛋白的体外表达 | 第26-28页 |
| 第三章 融合蛋白表达技术研究进展 | 第28-34页 |
| 1 融合蛋白的构建方式 | 第28-30页 |
| ·自我融合 | 第29页 |
| ·C端或N端融合 | 第29页 |
| ·双亲和融合 | 第29页 |
| ·信号肽与目的蛋白的融合 | 第29页 |
| ·分泌-亲和融合 | 第29页 |
| ·分泌-粘附融合 | 第29-30页 |
| 2 融合蛋白的连接 | 第30-34页 |
| ·直接相连 | 第31页 |
| ·稀有碱基相连 | 第31页 |
| ·柔性肽相连 | 第31-34页 |
| 第二部分 实验研究 | 第34-124页 |
| 第四章 鹅肠乳酸杆菌的调查、分离鉴定及筛选 | 第34-42页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·鹅粪便 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| ·正常鹅肠道乳酸杆菌调查 | 第35页 |
| ·样品的采集 | 第35页 |
| ·乳酸杆菌的分离 | 第35页 |
| ·乳酸杆菌的纯化 | 第35页 |
| ·乳酸杆菌的鉴定 | 第35-36页 |
| ·耐酸性试验 | 第36页 |
| ·耐胆盐试验 | 第36页 |
| ·乳酸杆菌质粒检测 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-40页 |
| ·鹅肠道乳酸杆菌调查结果 | 第37页 |
| ·乳酸杆菌鉴定结果 | 第37-39页 |
| ·乳酸杆菌耐酸性试验结果 | 第39-40页 |
| ·乳酸杆菌耐胆盐试验结果 | 第40页 |
| ·质粒检测结果 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第五章 乳酸杆菌S-层蛋白信号肽基因的克隆及序列测定 | 第42-54页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·菌种和质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·配制试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-47页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·L.brevis基因组DNA的提取 | 第44页 |
| ·PCR扩增L.brevis S-层信号肽(SP0) | 第44-45页 |
| ·SP0基因的纯化 | 第45页 |
| ·JM109感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·纯化的SP0基因与pMD18-T的连接 | 第46页 |
| ·转化感受态细胞 | 第46页 |
| ·质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·SP0基因序列测定及分析 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| ·PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·SP0测序结果 | 第48-49页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 5 小结 | 第52-54页 |
| 第六章 鹅细小病毒VP3基因的克隆、测序及分子特性分析 | 第54-70页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| ·病毒 | 第54-55页 |
| ·载体 | 第55页 |
| ·鹅胚 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-58页 |
| ·引物设计 | 第55-56页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第56页 |
| ·VP3基因PCR扩增 | 第56页 |
| ·PCR产物回收 | 第56页 |
| ·纯化产物酶切 | 第56-57页 |
| ·回收 | 第57页 |
| ·连接 | 第57页 |
| ·转化 | 第57页 |
| ·质粒的提取 | 第57页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·VP3基因序列测定 | 第58页 |
| ·VP3序列及推导蛋白质的生物信息学分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-67页 |
| ·PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第59页 |
| ·VP3编码基因的序列测定及同源性比较 | 第59-63页 |
| ·VP3基因推导氨基酸同源性比较 | 第63页 |
| ·系统进化树分析 | 第63-64页 |
| ·疏水性分析结果 | 第64-65页 |
| ·抗原性分析结果 | 第65页 |
| ·跨膜区预测结果 | 第65页 |
| ·磷酸化位点预测结果 | 第65-66页 |
| ·N-糖基化位点预测结果 | 第66-67页 |
| ·二级结构预测结果 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 5 小结 | 第69-70页 |
| 第七章 鹅白细胞介素-2基因及其成熟蛋白基因IL-2c的克隆、测序及生物信息学分析 | 第70-88页 |
| 1 材料 | 第70-71页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·菌株和质粒 | 第70页 |
| ·酶及试剂 | 第70-71页 |
| 2 方法 | 第71-76页 |
| ·IL-2基因的克隆 | 第71-75页 |
| ·IL-2成熟蛋白基因(IL2c)的克隆 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-85页 |
| ·RT-PCR结果 | 第76页 |
| ·四川白鹅IL-2基因的酶切鉴定结果 | 第76-77页 |
| ·IL-2序列测定结果 | 第77-78页 |
| ·IL-2基因同源性比较及遗传进化树分析 | 第78-80页 |
| ·IL-2信号肽预测 | 第80-81页 |
| ·IL-2成熟蛋白基因PCR结果 | 第81-82页 |
| ·pUC-IL2c酶切鉴定结果 | 第82页 |
| ·IL2c序列测定结果 | 第82-83页 |
| ·IL2c疏水性分析 | 第83-84页 |
| ·IL2c抗原性分析 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-86页 |
| 5 小结 | 第86-88页 |
| 第八章 鹅细小病毒结构蛋白VP3基因与鹅IL2c基因分泌性融合表达载体的构建 | 第88-106页 |
| 1 材料 | 第88-91页 |
| ·菌株及质粒 | 第88页 |
| ·酶及试剂 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第89-91页 |
| 2 方法 | 第91-97页 |
| ·SPO基因和VP3基因的连接 | 第91-92页 |
| ·SP+VP3基因的获取 | 第92-94页 |
| ·SP-VP3基因与IL-2c融合基因的构建 | 第94-95页 |
| ·分泌性表达载体的构建 | 第95-97页 |
| 3 结果 | 第97-102页 |
| ·SP0与VP3连接 | 第97页 |
| ·SP-VP3基因PCR | 第97-98页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第98-99页 |
| ·SP-VP3基因的序列测定 | 第99-100页 |
| ·pUC-SP-VP3-IL2c重组质粒酶切鉴定 | 第100页 |
| ·重组表达载体的PCR鉴定 | 第100页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第100-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| ·构建策略 | 第102页 |
| ·关于酶切位点的选择 | 第102页 |
| ·关于表达载体的选择 | 第102-103页 |
| ·关于融合蛋白的选择 | 第103-104页 |
| 5 小结 | 第104-106页 |
| 第九章 融合表达载体在乳酸杆菌中的分泌表达及其活性检测 | 第106-124页 |
| 1 材料 | 第106-107页 |
| ·菌株及表达质粒 | 第106页 |
| ·酶及试剂 | 第106页 |
| ·主要仪器 | 第106-107页 |
| 2 方法 | 第107-112页 |
| ·乳酸杆菌感受态细胞的制备 | 第107页 |
| ·电转化 | 第107-108页 |
| ·阳性菌株的筛选及鉴定 | 第108-109页 |
| ·融合蛋白在乳酸杆菌中的表达 | 第109-110页 |
| ·表达产物的转印 | 第110-111页 |
| ·表达产物的免疫印迹 | 第111页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第111-112页 |
| ·MTT法检测IL-2的活性 | 第112页 |
| 3 结果 | 第112-119页 |
| ·重组阳性乳酸杆菌的PCR鉴定 | 第112-113页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第113页 |
| ·表达条件的优化 | 第113-117页 |
| ·重组蛋白的相对表达量 | 第117页 |
| ·表达产物Western-blotting分析 | 第117-118页 |
| ·重组蛋白过柱纯化效果 | 第118-119页 |
| ·表达产物IL2c蛋白活性分析 | 第119页 |
| 4 讨论 | 第119-122页 |
| ·关于电转化 | 第119-120页 |
| ·诱导表达 | 第120页 |
| ·表达条件的优化 | 第120-121页 |
| ·Western-blotting检测 | 第121页 |
| ·MTT法检测IL2c蛋白活性 | 第121-122页 |
| 5 小结 | 第122-124页 |
| 第三部分 结论 | 第124-126页 |
| 第四部分 参考文献 | 第126-144页 |
| 第五部分 附件材料 | 第144-154页 |
| 附录一 主要溶液的配制 | 第144-148页 |
| 附录二 测序图谱 | 第148-154页 |
| 1 pMD-SP0基因测序结果 | 第148页 |
| 2 pUC57-VP3基因测序结果 | 第148-150页 |
| 3 pMD-IL2基因测序结果 | 第150页 |
| 4 pUC-IL2c基因测序结果 | 第150-151页 |
| 5 pMD-SP-VP3基因测序结果 | 第151-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 作者简介 | 第156-158页 |
| 后记 | 第158页 |
