| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-32页 |
| 1.脱落酸信号转导研究进展 | 第14-18页 |
| ·脱落酸的结合位点与受体 | 第14-15页 |
| ·脱落酸与胞内信使 | 第15-16页 |
| ·ABA的调控机制 | 第16-17页 |
| ·脱落酸在果实发育中的生理作用 | 第17-18页 |
| ·研究展望 | 第18页 |
| 2.植物蛋白激酶研究进展 | 第18-22页 |
| ·植物蛋白激酶 | 第18-19页 |
| ·植物蛋白激酶家族分类 | 第19页 |
| ·植物体中蛋白质磷酸化及其调节机制 | 第19-20页 |
| ·植物蛋白激酶的生理功能 | 第20-21页 |
| ·研究展望 | 第21-22页 |
| 3.钙依赖蛋白激酶(CDPK)研究进展 | 第22-29页 |
| ·CDPK序列结构和生化特性 | 第22-25页 |
| ·CDPK活性的调控 | 第25-28页 |
| ·CDPK底物以及专一性 | 第28-29页 |
| ·研究展望 | 第29页 |
| 4.绿色荧光蛋白(GFP)的应用 | 第29-30页 |
| 5.本研究的目的和意义 | 第30页 |
| 6.本研究主要内容 | 第30-32页 |
| 第二章 苹果类钙依赖蛋白激酶全长基因的克隆及其序列分析 | 第32-65页 |
| 摘要 | 第32-33页 |
| 1 材料与方法 | 第33-43页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·MdCPK1全长基因的克隆策略 | 第33-34页 |
| ·引物的设计 | 第34-35页 |
| ·苹果果实RNA的提取 | 第35页 |
| ·总RNA及浓度的测定 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第36页 |
| ·MdCPK1保守序列的扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第37页 |
| ·目的片断和测序载体的连接 | 第37页 |
| ·重组质粒的转化 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·MdCPK1 5’端基因的克隆(5’—RACE) | 第38-39页 |
| ·MdCPK1 3’端基因的克隆(3’—RACE) | 第39-40页 |
| ·MdCPK1全长基因的扩增 | 第40页 |
| ·苹果基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·Southern blot | 第41-43页 |
| 2.结果与分析 | 第43-61页 |
| ·.RNA的质量检查结果 | 第43页 |
| ·MdCPK1保守同源片段的获得 | 第43-44页 |
| ·MdCPK1 5’端基因的克隆(5’—RACE) | 第44页 |
| ·MdCPK1 3’端基因的克隆(3’—RACE) | 第44-46页 |
| ·MdCPK1全长基因的克隆 | 第46-50页 |
| ·MdCPK1的序列同源性分析 | 第50-57页 |
| ·MdCPK1蛋白的跨膜区分析 | 第57页 |
| ·MdCPK1的系统进化树分析 | 第57-59页 |
| ·MdCPK1的Southern Blot分析 | 第59-61页 |
| 3.小结 | 第61页 |
| 4.讨论 | 第61-64页 |
| 英文摘要 | 第64-65页 |
| 第三章 苹果类钙依赖蛋白激酶的原核表达及抗体制备 | 第65-84页 |
| 摘要 | 第65-66页 |
| 1.材料与方法 | 第66-74页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·原核表达载体pGEX—MdCPK~L的构建 | 第66-67页 |
| ·原核表达载体pGEX-MdCPK~N的构建 | 第67-68页 |
| ·GST-MdCPK~L融合蛋白和GST-MdCPK~N融合蛋白的原核诱导表达 | 第68页 |
| ·GST-MdCPK~L融合蛋白和GST-MdCPK~N融合蛋白的检测 | 第68页 |
| ·细菌的裂解和包涵体的制备 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白的亲和纯化 | 第69页 |
| ·抗原的制备 | 第69-70页 |
| ·免疫小鼠 | 第70页 |
| ·抗血清效价的测定(ELISA) | 第70页 |
| ·抗体的纯化 | 第70-71页 |
| ·Protein dot blot分析 | 第71页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot | 第71-74页 |
| 2.结果与分析 | 第74-81页 |
| ·原核表达载体pGEX-MdCPK~L的构建 | 第74页 |
| ·GST-MdCPK~L融合蛋白的诱导表达 | 第74-76页 |
| ·GST-MdCPK~L蛋白免疫小鼠的血清效价(ELISA)的测定结果 | 第76-77页 |
| ·GST-MdCPK~L蛋白Protein Dot Blot | 第77-78页 |
| ·原核表达载体pGEX-MdCPK~N的构建 | 第78-79页 |
| ·GST-MdCPK~N融合蛋白的诱导表达 | 第79页 |
| ·GST-MdCPK~N蛋白免疫小鼠的血清效价(ELISA)的测定结果 | 第79-80页 |
| ·GST-MdCPK~N蛋白的Protein Dot Blot | 第80-81页 |
| 3.小结 | 第81页 |
| 4.讨论 | 第81-83页 |
| 英文摘要 | 第83-84页 |
| 第四章 苹果类钙依赖蛋白激酶的亚细胞定位 | 第84-99页 |
| 摘要 | 第84-85页 |
| 1.材料与方法 | 第85-89页 |
| ·材料 | 第85页 |
| ·瞬时表达载体pMdCPK~L-GFP的构建 | 第85-86页 |
| ·苹果果肉微粒体的制备 | 第86页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第86-87页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot | 第87页 |
| ·拟南芥原生质体的分离 | 第87页 |
| ·荧光素醋酸盐(FDA)染色 | 第87页 |
| ·PEG融合法转化原生质体 | 第87-88页 |
| ·基因枪法转化基因到洋葱表皮细胞 | 第88页 |
| ·显微镜观察 | 第88-89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-96页 |
| ·瞬时表达载体pMdCPK—GFP的构建 | 第89-90页 |
| ·拟南芥原生质体的分离 | 第90页 |
| ·荧光素醋酸盐(FDA)染色结果 | 第90页 |
| ·pMdCPK~L-GFP在洋葱表皮细胞的亚细胞定位结果 | 第90页 |
| ·pMdCPK~L-GFP在拟南芥原生质体细胞的亚细胞定位结果 | 第90-93页 |
| ·MdCPK1蛋白在苹果果实不同组分的表达 | 第93-96页 |
| 3 小结 | 第96页 |
| 4 讨论 | 第96-98页 |
| 英文摘要 | 第98-99页 |
| 第五章 苹果类钙依赖蛋白激酶在果实中特异表达并受到脱落酸的激活 | 第99-111页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| 1.材料与方法 | 第100-103页 |
| ·材料 | 第100页 |
| ·ABA处理实验 | 第100页 |
| ·苹果叶片RNA的提取 | 第100-101页 |
| ·DNA的去除 | 第101页 |
| ·RNA浓度的测定 | 第101页 |
| ·RT-PCR反转录 | 第101-102页 |
| ·苹果elongation factor genes(EF-1a)的扩增 | 第102页 |
| ·苹果MdCPK1目的基因(510bp)的扩增 | 第102-103页 |
| ·苹果果肉微粒体的制备 | 第103页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第103页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot | 第103页 |
| 2.结果与分析 | 第103-108页 |
| ·MdCPK1的组织特异性研究 | 第103-105页 |
| ·外源ABA处理对MdCPK1蛋白表达量的影响 | 第105-108页 |
| 3.小结 | 第108页 |
| 4.讨论 | 第108-110页 |
| 英文摘要 | 第110-111页 |
| 第六章 结论与推论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 个人简历 | 第124页 |
