| 目录 | 第1-4页 |
| 内容提要 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-24页 |
| 1 BMPs概述 | 第9-14页 |
| ·BMPs的结构特点及分类 | 第9-10页 |
| ·BMPs的理化特征及基因定位 | 第10-11页 |
| ·BMPs的受体及信号转导机制 | 第11-12页 |
| ·BMPs的诱骨活性 | 第12-13页 |
| ·BMPs的重组表达研究 | 第13-14页 |
| 2 毕赤酵母真核表达系统及影响表达的因素 | 第14-20页 |
| ·外源基因对Pichia pastoris表达外源蛋白的影响 | 第15-16页 |
| ·宿主菌 | 第16-17页 |
| ·表达载体 | 第17-18页 |
| ·表达产物糖基化 | 第18-20页 |
| 3 分子内分子伴侣及其辅助蛋白质折叠的机制 | 第20-24页 |
| ·分子内分子伴侣的概念和分类 | 第20-21页 |
| ·分子内分子伴侣的结构特点 | 第21页 |
| ·分子内分子伴侣介导的蛋白质折叠的特点和机制 | 第21-24页 |
| 第二部分 表达载体pPIC9K-hBMP4／pro-ori和pPIC9K-hBMP4／pro-mut的构建 | 第24-38页 |
| 1.实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·工具酶 | 第24页 |
| ·生化试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 2.方法及步骤 | 第25-33页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-ori的构建 | 第25-30页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-mut的构建 | 第30-33页 |
| 3 结果 | 第33-38页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-ori的构建 | 第33-35页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-mut的构建 | 第35-38页 |
| 第三部分 重组质粒pPIC9K-hBMP4／pro-ori、pPIC9K-hBMP4／pro-mut及pPIC9K-hBMP4在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第38-54页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·工具酶 | 第38页 |
| ·生化试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第39-40页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第40-47页 |
| ·pPIC9K-hBMP4／pro-ori在毕赤酵母中的表达 | 第40-47页 |
| ·pPIC9K-hBMP4／pro-mut在毕赤酵母中的表达 | 第47页 |
| ·pPIC9K-hBMP4在毕赤酵母中的表达 | 第47页 |
| 3 实验结果 | 第47-54页 |
| ·质粒线性化 | 第47-48页 |
| ·酵母转化子的筛选及鉴定 | 第48-49页 |
| ·小量摇瓶表达筛选高表达菌株 | 第49-51页 |
| ·表达上清的Westrn Bloting分析 | 第51-54页 |
| 第四部分 小结与讨论 | 第54-60页 |
| 1 小结 | 第54-55页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-ori的构建 | 第54页 |
| ·表达质粒pPIC9K-hBMP4／pro-mut的构建 | 第54页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hBMP4／pro-ori和pPIC9K-hBMP4／pro-mut在毕赤酵母中的表达 | 第54-55页 |
| 2 讨论 | 第55-60页 |
| ·关于表达系统和表达载体的选择 | 第55-56页 |
| ·关于表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·表达产物的分析 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 英文缩写 | 第65页 |
