| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-19页 |
| 1． 核型多角体病毒病毒概述 | 第8-10页 |
| 1．1 核型多角体病毒的发现、分类以及发展 | 第8-9页 |
| 1．2 核型多角体病毒的结构与功能 | 第9-10页 |
| 2． 细胞凋亡的研究进展 | 第10-15页 |
| 2．1 细胞凋亡的概念及生理意义 | 第10-11页 |
| 2．2 杆状病毒基因及性质 | 第11-12页 |
| 2．3 杆状病毒中与细胞凋亡相关的基因 | 第12-15页 |
| 3． 研究昆虫杆状病毒的意义 | 第15-17页 |
| 3．1 杆状病毒表达载体系统的开发应用 | 第15-16页 |
| 3．2 昆虫杆状病毒在生物防治中的作用 | 第16-17页 |
| 4． 实验设计 | 第17-19页 |
| 第一章 油桐尺蠖核型多角体病毒p35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第19-32页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1． 材料 | 第19-20页 |
| 2． 方法 | 第20-22页 |
| 2．1 BsNPV多角体的提纯 | 第20页 |
| 2．2 病毒基因组的提取 | 第20-21页 |
| 2．3 BsNPVp35基因的扩增、克隆与测序 | 第21页 |
| 2．4 感受态细胞的制备 | 第21页 |
| 2．5 酶切和连接 | 第21页 |
| 2．5．1 限制性酶消化反应 | 第21页 |
| 2．5．2 DNA连接反应 | 第21页 |
| 2．6 DNA对感受态细胞的转化、涂布及培养 | 第21-22页 |
| 2．7 质粒的提取 | 第22页 |
| 2．8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-APGE) | 第22页 |
| 2．9 蛋白的表达及样品的处理 | 第22页 |
| 3． 结果 | 第22-30页 |
| 3．1 BsNPV基因组的提取及 PCR | 第22-23页 |
| 3．2 TA克隆与测序 | 第23页 |
| 3．3 对 BsNPVp35基因序列的分析 | 第23-25页 |
| 3．4 对预测的 BsNPVP35蛋白的系统进化分析 | 第25-27页 |
| 3．5 原核表达质粒pGBp35的克隆与鉴定 | 第27-29页 |
| 3．6 BsNPVp35基因的表达与 SDS-PAGE电泳分析 | 第29-30页 |
| 4． 讨论 | 第30-32页 |
| 4．1 BsNPV基因组的提取 | 第30页 |
| 4．2 BsNPVP35基因结构及同源性分析 | 第30页 |
| 4．3 BsNPVP35蛋白的分子进化树分析 | 第30-31页 |
| 4．4 BsNPVP35蛋白的 SDS-PAGE电泳分析 | 第31-32页 |
| 第二章 BsNPV p35基因与棉铃虫细胞的互作 | 第32-42页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1． 材料 | 第32-33页 |
| 2． 方法 | 第33-38页 |
| 2．1 目的基因的克隆及检测 | 第33页 |
| 2．2 pIZ/V5-p35-egft重组载体的构建 | 第33页 |
| 2．3 质粒的扩增 | 第33页 |
| 2．4 细胞培养及 DNA转染 | 第33-34页 |
| 2．4．1 昆虫细胞及其传代培养 | 第34页 |
| 2．4．2 Lipofectamin介导外源 DNA转染真核细胞 | 第34页 |
| 2．5 转染后对细胞表达情况的观察 | 第34-35页 |
| 2．5．1 苔盼蓝拒染实验 | 第34-35页 |
| 2．6 细胞凋亡的检测 | 第35-36页 |
| 2．6．1 光学显微镜观察 | 第35页 |
| 2．6．2 细胞 DNA的提取和电泳分析 | 第35页 |
| 2．6．3 彗星实验、电镜观察、流式细胞法 | 第35-36页 |
| 2．7 细胞表达外源蛋白的 SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳检测 | 第36-38页 |
| 3． 结果 | 第38-39页 |
| 3．1 BsNPVp35终止密码子的突变 | 第38页 |
| 3．2 BsNPVp35基因突变体的克隆和测序 | 第38页 |
| 3．3 pIZ/V5-p35重组载体的构建与鉴定 | 第38页 |
| 3．4 pIZ/V5-p35-egfp重组载体的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 3．5 细胞培养和 DNA转染 | 第39页 |
| 4． 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 运用 Bac-to-Bac表达系统研究 BsNPVp35基因与棉铃虫细胞在体内的互作 | 第42-48页 |
| 1． 材料 | 第42页 |
| 2． 方法 | 第42-45页 |
| 2．1 重组载体的构建 | 第42-44页 |
| 2．2 细胞培养及转染 | 第44-45页 |
| 2．3 细胞表达蛋白的 SDS-PAGE电泳分析 | 第45页 |
| 3． 结果 | 第45-46页 |
| 4． 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
