中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-12页 |
符号说明 | 第12-14页 |
前言 | 第14-19页 |
材料 | 第19-24页 |
技术路线 | 第24-25页 |
方法 | 第25-40页 |
一 免疫及外周血淋巴细胞的分离 | 第25页 |
二 细胞总RNA的提取 | 第25-26页 |
三 反转录合成cDNA | 第26页 |
四 PCR扩增人Ig轻链和重链Fd段基因 | 第26-27页 |
五 噬菌粒pComb3的抽提纯化 | 第27-28页 |
六 载体pComb3和混合人Ig轻链基因的双酶切(SaeI、XbaI) | 第28-29页 |
七 从凝胶中回收酶切产物 | 第29页 |
八 pComb3与混合人Ig轻链基因的连接 | 第29页 |
九 大肠杆菌XL1-Blue感受态细菌的制备 | 第29-30页 |
十 人Ig轻链基因库(pComb3-L)的构建及鉴定 | 第30-31页 |
十一 人Fab抗体基因库的构建及鉴定 | 第31页 |
十二 辅助噬菌体(VCSM13)的扩增及效价测定 | 第31-32页 |
十三 噬菌体人Fab抗体库的构建 | 第32-33页 |
十四 筛选和富集展示人源TAT-Fab抗体噬菌体 | 第33页 |
十五 ELISA鉴定展示人源TAT-Fab抗体噬茵体 | 第33-34页 |
十六 对阳性克隆(人源TAT-Fab-pComb3)DNA测序(大连宝生物完成) | 第34页 |
十七 可溶性人源TAT-Fab抗体工程菌的构建及鉴定 | 第34页 |
十八 可溶性人源TAT-Fab抗体的表达 | 第34-35页 |
十九 ELISA鉴定可溶性人源TAT-Fab抗体的亲和性 | 第35页 |
二十 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35-36页 |
二十一 蛋白免疫印迹印迹检测(Western blot) | 第36-37页 |
二十二 可溶性人源TAT-Fab抗体的纯化 | 第37-38页 |
二十三 动物试验鉴定可溶性人源TAT-Fab抗体的生物活性 | 第38-40页 |
结果 | 第40-45页 |
一 人Fab抗体基因库的构建 | 第40-41页 |
二 展示人源TAT-Fab抗体噬菌体的筛选和富集 | 第41-42页 |
三 展示人源TAT-Fab抗体噬菌体的鉴定 | 第42页 |
四 可溶性人源TAT-Fab抗体在大肠杆菌XL1-Blue表达及鉴定 | 第42-44页 |
五 可溶性人源TAT-Fab抗体的纯化及生物活性的鉴定 | 第44-45页 |
讨论 | 第45-56页 |
结论 | 第56-57页 |
附图 | 第57-69页 |
参考文献 | 第69-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
发表论文和著作目录 | 第75-76页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第76页 |