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免疫噬菌体抗体库的建立和人源TAT-Fab抗体的制备

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-12页
符号说明第12-14页
前言第14-19页
材料第19-24页
技术路线第24-25页
方法第25-40页
 一 免疫及外周血淋巴细胞的分离第25页
 二 细胞总RNA的提取第25-26页
 三 反转录合成cDNA第26页
 四 PCR扩增人Ig轻链和重链Fd段基因第26-27页
 五 噬菌粒pComb3的抽提纯化第27-28页
 六 载体pComb3和混合人Ig轻链基因的双酶切(SaeI、XbaI)第28-29页
 七 从凝胶中回收酶切产物第29页
 八 pComb3与混合人Ig轻链基因的连接第29页
 九 大肠杆菌XL1-Blue感受态细菌的制备第29-30页
 十 人Ig轻链基因库(pComb3-L)的构建及鉴定第30-31页
 十一 人Fab抗体基因库的构建及鉴定第31页
 十二 辅助噬菌体(VCSM13)的扩增及效价测定第31-32页
 十三 噬菌体人Fab抗体库的构建第32-33页
 十四 筛选和富集展示人源TAT-Fab抗体噬菌体第33页
 十五 ELISA鉴定展示人源TAT-Fab抗体噬茵体第33-34页
 十六 对阳性克隆(人源TAT-Fab-pComb3)DNA测序(大连宝生物完成)第34页
 十七 可溶性人源TAT-Fab抗体工程菌的构建及鉴定第34页
 十八 可溶性人源TAT-Fab抗体的表达第34-35页
 十九 ELISA鉴定可溶性人源TAT-Fab抗体的亲和性第35页
 二十 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第35-36页
 二十一 蛋白免疫印迹印迹检测(Western blot)第36-37页
 二十二 可溶性人源TAT-Fab抗体的纯化第37-38页
 二十三 动物试验鉴定可溶性人源TAT-Fab抗体的生物活性第38-40页
结果第40-45页
 一 人Fab抗体基因库的构建第40-41页
 二 展示人源TAT-Fab抗体噬菌体的筛选和富集第41-42页
 三 展示人源TAT-Fab抗体噬菌体的鉴定第42页
 四 可溶性人源TAT-Fab抗体在大肠杆菌XL1-Blue表达及鉴定第42-44页
 五 可溶性人源TAT-Fab抗体的纯化及生物活性的鉴定第44-45页
讨论第45-56页
结论第56-57页
附图第57-69页
参考文献第69-74页
致谢第74-75页
发表论文和著作目录第75-76页
学位论文评阅及答辩情况表第76页

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