| 前言 | 第1-15页 |
| 1 病原学 | 第7-8页 |
| 2 致病机制 | 第8-9页 |
| 3 流行病学 | 第9-11页 |
| 3．1 流行情况和分布 | 第9-10页 |
| 3．2 病理变化 | 第10-11页 |
| 4 PCV分子生物学 | 第11-12页 |
| 5 诊断 | 第12-13页 |
| 5．1 ELISA诊断方法 | 第12页 |
| 5．2 PCR方法 | 第12-13页 |
| 5．3 核酸探针及原位杂交方法 | 第13页 |
| 6 免疫预防 | 第13页 |
| 7 PEGFP-C1载体的特点 | 第13-14页 |
| 8 实验目的和意义 | 第14-15页 |
| 材料和方法 | 第15-46页 |
| 1 材料 | 第15-18页 |
| 2 方法 | 第18-31页 |
| 2．1 猪圆环病毒2型 ORF2基因真核表达载体的构建 | 第18-22页 |
| 2．1．1 重组质粒pEGFP-C1-ORF2*的构建 | 第19-21页 |
| 2．1．2 重组质粒pEGFP-C1-ORF2的构建 | 第21-22页 |
| 2．2 重组质粒pEGFP-C1-ORF2的鉴定 | 第22-24页 |
| 2．2．1 酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 2．2．2 菌落 PCR鉴定 | 第23页 |
| 2．2．3 核酸杂交鉴定 | 第23-24页 |
| 2．2．4 测序 | 第24页 |
| 2．3 表达 | 第24-25页 |
| 2．3．1 重组质粒pEGFP-ORF2的瞬时表达 | 第24-25页 |
| 2．3．2 重组质粒pEGFP-ORF2的稳定表达 | 第25页 |
| 2．4 表达产物鉴定 | 第25-27页 |
| 2．4．1 绿色荧光的检测 | 第25页 |
| 2．4．2 SDS-PAGE电泳检测 | 第25-27页 |
| 2．5 ELISA方法的建立 | 第27-31页 |
| 2．5．1 抗原的制备 | 第27页 |
| 2．5．2 酶标 SPA的制备 | 第27-28页 |
| 2．5．3 酶标 SPA工作浓度的选择 | 第28页 |
| 2．5．4 抗原的最适包被浓度和血清最适工作浓度的确定 | 第28-29页 |
| 2．5．5 判定标准的确定 | 第29页 |
| 2．5．6 ELISA方法的操作程序 | 第29页 |
| 2．5．7 特异性试验 | 第29-30页 |
| 2．5．8 重复性试验 | 第30页 |
| 2．5．9 与 IDEXX公司试剂盒比较试验 | 第30页 |
| 2．5．10 临床样品的检测 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-41页 |
| 3．1 猪圆环病毒2型 ORF2基因真核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 3．1．1 重组质粒pEGFP-C1-ORF2*的构建 | 第31-33页 |
| 3．1．2 重组质粒pEGFP-C1-ORF2的构建 | 第33页 |
| 3．2 重组质粒pEGFP-C1-ORF2的鉴定 | 第33-35页 |
| 3．2．1 重组质粒pEGFP-C1-ORF2的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 3．2．2 菌落 PCR鉴定 | 第34页 |
| 3．2．3 核酸杂交鉴定 | 第34-35页 |
| 3．2．3 测序 | 第35页 |
| 3．3 表达产物鉴定 | 第35-37页 |
| 3．3．1 绿色荧光的检测 | 第35页 |
| 3．3．2 SDS-PAGE和 Western-blot | 第35-37页 |
| 3．4 ELISA方法的建立 | 第37-41页 |
| 3．4．1 抗原的制备 | 第37页 |
| 3．4．2 酶标 SPA工作浓度的选择 | 第37页 |
| 3．4．3 抗原和血清最适工作浓度的选择 | 第37-38页 |
| 3．4．4 判定标准 | 第38页 |
| 3．4．5 ELISA特异性试验 | 第38页 |
| 3．4．6 重复实验 | 第38-39页 |
| 3．4．7 间接 ELISA与 IDEXX试剂盒比较 | 第39页 |
| 3．4．8 临床样品的检测 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-46页 |
| 4．1 真核表达载体的建立 | 第41-42页 |
| 4．2 关于表达 | 第42-44页 |
| 4．3 关于 ELISA诊断方法 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第54页 |
