| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 哺乳动物脂质代谢机制 | 第10-15页 |
| 1.1.1 脂肪的来源及分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 脂肪的分布 | 第11-12页 |
| 1.1.3 肌内脂肪与肉质的关系 | 第12-13页 |
| 1.1.4 脂肪的分解代谢 | 第13-14页 |
| 1.1.5 脂肪的合成代谢 | 第14-15页 |
| 1.2 DGAT1和DGAT2的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 DGAT1的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.2 DGAT2的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 猪原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞体外培养技术研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 原代肝细胞培养技术的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.2 肌内前体脂肪细胞培养技术的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 RNAi研究进展 | 第20-25页 |
| 1.4.1 RNAi发现史 | 第20-21页 |
| 1.4.2 RNAi的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.4.3 RNAi的应用 | 第22-25页 |
| 2 RNA干扰载体的构建 | 第25-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 载体、细胞及主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 靶向DGAT1和DGAT2干扰片段的设计 | 第25-27页 |
| 2.2.2 shDNA模板的退火 | 第27页 |
| 2.2.3 pGPU6/GFP/Neo载体的线性化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 pGPU6/GFP/Neo-shRNA载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组质粒的转化 | 第29页 |
| 2.2.6 阳性克隆的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3 试验结果 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 3 猪原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞体外培养系的建立 | 第33-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.4 部分试剂的配制 | 第34-35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 猪原代肝细胞的分离培养 | 第35页 |
| 3.2.2 猪肌内前体脂肪细胞的分离培养及诱导分化 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-38页 |
| 3.3.1 猪肝细胞形态观察 | 第36-37页 |
| 3.3.2 猪肌内前体脂肪细胞形态及诱导分化后形态观察 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-40页 |
| 4 shRNA干扰载体的转染及干扰效率的检测 | 第40-49页 |
| 4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 细胞及主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 shRNA干扰载体转染猪肝细胞和肌内前体脂肪细胞 | 第41页 |
| 4.2.2 细胞总RNA提取及cDNA合成 | 第41-42页 |
| 4.2.3 荧光定量引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| 4.2.4 qRT-PCR检测干扰效率 | 第43页 |
| 4.3 统计分析方法 | 第43页 |
| 4.4 试验结果 | 第43-48页 |
| 4.4.1 干扰载体转染细胞的显微观察 | 第43-44页 |
| 4.4.2 细胞总RNA的提取结果 | 第44-45页 |
| 4.4.3 pGPU6/GFP/Neo-shRNA对原代肝细胞和肌内前体脂肪细胞中DGAT1和DGAT2基因mRNA表达的影响 | 第45-48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-49页 |
| 5 pGPU6/GFP/Neo-shRNA对细胞脂质性状的影响 | 第49-53页 |
| 5.1 试验材料 | 第49页 |
| 5.1.1 主要试剂盒 | 第49页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第49页 |
| 5.2 试验方法 | 第49-50页 |
| 5.3 统计分析方法 | 第50页 |
| 5.4 试验结果 | 第50-51页 |
| 5.5 讨论 | 第51-53页 |
| 6 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
