| 符号说明 | 第1-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1．1 水蛭肽的简介 | 第12-16页 |
| 1．1．1 水蛭素、水蛭肽的结构及其抗凝血机理 | 第12-14页 |
| 1．1．2 水蛭肽的临床效果 | 第14-16页 |
| 1．1．3 水蛭肽与肝素的比较 | 第16页 |
| 1．2 水蛭肽(素)的研究、生产历程 | 第16-19页 |
| 1．2．1 水蛭肽(素)的研究历程 | 第16-18页 |
| 1．2．2 水蛭肽(素)的生产历程 | 第18-19页 |
| 1．3 有关的试验技术 | 第19-26页 |
| 1．3．1 质粒的提取与纯化 | 第19-20页 |
| 1．3．2 DNA的凝胶电泳 | 第20-21页 |
| 1．3．3 基因工程表达系统 | 第21-24页 |
| 1．3．4 外源基因转化 | 第24页 |
| 1．3．5 常用的肽类分析技术 | 第24-25页 |
| 1．3．6 电印迹 | 第25-26页 |
| 1．4 水蛭肽的市场前景 | 第26-28页 |
| 第二章 重组质粒pPIC9-hir的构建 | 第28-40页 |
| 2．1 设计思路及研究方案 | 第28页 |
| 2．1．1 基因序列的设计 | 第28页 |
| 2．1．2 工程设计 | 第28页 |
| 2．2 试验材料 | 第28-30页 |
| 2．2．1 菌种与质粒 | 第28-29页 |
| 2．2．2 试剂与工具酶 | 第29-30页 |
| 2．2．3 PCR引物 | 第30页 |
| 2．2．4 仪器与设备 | 第30页 |
| 2．3 试验操作 | 第30-36页 |
| 2．3．1 pBluescript-hir质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2．3．2 PCR扩增hir-1 | 第31-32页 |
| 2．3．3 hir-1的双酶切 | 第32-33页 |
| 2．3．4 DE81滤纸收集hir-2 | 第33-34页 |
| 2．3．5 sephacryl s-1000凝胶柱纯化质粒pPIC9 | 第34-35页 |
| 2．3．6 质粒pPIC9的双酶切与收集 | 第35页 |
| 2．3．7 连接反应 | 第35页 |
| 2．3．8 转化pPIC9-hir入JM109 | 第35-36页 |
| 2．3．9 筛选菌种WY-2 | 第36页 |
| 2．4 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2．4．1 目的基因的验证 | 第36-38页 |
| 2．4．2 质粒pPIC9溶液的浓度测定 | 第38页 |
| 2．4．3 质粒pPIC9-hir的酶切鉴定 | 第38-40页 |
| 第三章 基因转化与菌种WY-3的筛选 | 第40-44页 |
| 3．1 研究方案 | 第40页 |
| 3．2 试验材料 | 第40-41页 |
| 3．2．1 菌种 | 第40页 |
| 3．2．2 试剂 | 第40页 |
| 3．2．3 仪器设备 | 第40-41页 |
| 3．3 试验操作 | 第41-42页 |
| 3．3．1 电穿孔转化 | 第41-42页 |
| 3．3．2 不同型号电转化仪的使用比较 | 第42页 |
| 3．3．3 筛选his~+Mut~s表型的阳性克隆 | 第42页 |
| 3．4 结果与分析 | 第42-44页 |
| 第四章 目的蛋白的诱导表达与分析 | 第44-54页 |
| 4．1 试验材料 | 第44页 |
| 4．1．1 试剂 | 第44页 |
| 4．1．2 仪器设备 | 第44页 |
| 4．2 试验操作 | 第44-51页 |
| 4．2．1 前水蛭肽的诱导表达 | 第44-46页 |
| 4．2．2 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳 | 第46-49页 |
| 4．2．3 电印迹 | 第49-50页 |
| 4．2．4 不同染色方法的比较 | 第50-51页 |
| 4．3 结果与分析 | 第51-54页 |
| 4．3．1 电泳结果 | 第51-52页 |
| 4．3．2 蛋白酶抑制剂的研究 | 第52页 |
| 4．3．3 重组克隆在不同培养基上的生长 | 第52页 |
| 4．3．4 染色方法的研究 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录一 培养基 | 第60-63页 |
| 附录二 缓冲液 | 第63-64页 |
| 附录三 基因序列查新报告 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
