| 提要 | 第1-8页 |
| 主要缩略词表 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一部分 大肠癌中p16 蛋白的表达及临床意义 | 第11-19页 |
| 一. 材料与方法 | 第11-15页 |
| 1. 研究对象 | 第11页 |
| 2. 主要试剂 | 第11-12页 |
| 3. 主要仪器 | 第12页 |
| 4. 主要试剂的配制 | 第12-13页 |
| 5. 实验方法 | 第13-14页 |
| 6. 结果判断 | 第14页 |
| 7. 统计学处理 | 第14-15页 |
| 二. 结果 | 第15-17页 |
| 1. p16 在大肠癌组织与正常大肠组织中的表达 | 第15页 |
| 2. p16 在不同病理学分级大肠癌组织中的表达 | 第15-16页 |
| 3. p16 在不同Dukes 分期大肠癌组织中的表达 | 第16页 |
| 4. 免疫组化染色结果 | 第16-17页 |
| 三. 讨论 | 第17-19页 |
| 第二部分 pcDNA3+-p16 质粒的构建及鉴定 | 第19-31页 |
| 一. 实验材料与设备 | 第19-22页 |
| 1. 材料和试剂 | 第19-20页 |
| 2. 主要仪器 | 第20-21页 |
| 3. 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 二. 实验方法 | 第22-28页 |
| 1. p16 基因片段的获得 | 第22页 |
| 2. p16 基因的PCR 扩增 | 第22-23页 |
| 3. 扩增产物的鉴定 | 第23页 |
| 4. PCR 产物的纯化 | 第23-24页 |
| 5. 质粒的重组连接 | 第24页 |
| 6. 感受态细胞的制备及转化 | 第24-26页 |
| 7. 重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第26页 |
| 8. 重组质粒的提取与纯化回收 | 第26-28页 |
| 三. 结果 | 第28-29页 |
| 1. p16 基因的PCR 扩增结果 | 第28-29页 |
| 2. 重组质粒的鉴定结果 | 第29页 |
| 四. 讨论 | 第29-31页 |
| 第三部分 p16 基因转染及放射对大肠癌细胞的影响 | 第31-56页 |
| 一. 实验材料与设备 | 第31-34页 |
| 1. 主要材料与试剂 | 第31-32页 |
| 2. 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3. 质粒 | 第33页 |
| 4. 主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| 5. 细胞系 | 第34页 |
| 二. 实验方法 | 第34-43页 |
| 1. SWWC 细胞的培养 | 第34-35页 |
| 2. 脂质体Lipofectamine 介导基因转染 | 第35页 |
| 3. 免疫组织化学法检测细胞p16 蛋白的表达 | 第35-37页 |
| 4. 流式细胞技术检测细胞周期变化 | 第37页 |
| 5. RT-PCR 检测细胞p16mRNA 的表达 | 第37-40页 |
| 6. Western blot 检测细胞p16 蛋白的表达 | 第40-42页 |
| 7. 细胞抑制率的计算 | 第42-43页 |
| 8. 统计学处理 | 第43页 |
| 三. 结果 | 第43-51页 |
| 1. 细胞的转染和筛选 | 第43页 |
| 2. 免疫组化检测细胞p16 蛋白表达 | 第43页 |
| 3. 流式细胞技术显示细胞周期的变化 | 第43-45页 |
| 4. 细胞p16mRNA 的表达及表达含量 | 第45-46页 |
| 5. 细胞p16 蛋白的表达及表达灰度 | 第46-48页 |
| 6. 细胞OD 值及抑制率的变化 | 第48-51页 |
| 四. 讨论 | 第51-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 本研究创新之处 | 第57-58页 |
| 综述 | 第58-75页 |
| 综述一：p16 基因的研究进展 | 第58-66页 |
| 一. p16 基因的发现 | 第58-59页 |
| 二. p16 基因的结构 | 第59页 |
| 三. p16 基因的生物学特性 | 第59-60页 |
| 四. p16 基因与肿瘤 | 第60-63页 |
| 五. p16 基因与细胞周期 | 第63-66页 |
| 综述二：放射治疗的现状及展望 | 第66-75页 |
| 一. 放射治疗的机制 | 第66-67页 |
| 二. 肿瘤的放射治疗现状 | 第67-71页 |
| 三. 基因联合放射治疗 | 第71-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 附图 | 第85-88页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 中文摘要 | 第89-92页 |
| Abstract | 第92-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
