| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 DR5 cDNA胞外区域的克隆与原核表达 | 第13-31页 |
| 1 材料和方法 | 第13-22页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·方法 | 第15-22页 |
| ·细胞培养 | 第15页 |
| ·引物的设计与合成 | 第15页 |
| ·HepG2细胞总RNA的提取 | 第15页 |
| ·RT-PCR | 第15-16页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第16-17页 |
| ·DR5胞外区域原核融合表达载体的构建 | 第17-21页 |
| ·重组表达载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白 | 第22页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第22页 |
| ·融合蛋白GST-eDR5的可溶性和包涵体的分析 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-29页 |
| ·肝癌细胞HepG2总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第23页 |
| ·重组克隆载体和重组表达载体的酶切鉴定及测序结果 | 第23-26页 |
| ·eDR5(P_1P_2和P_3P_4)在大肠杆菌中的表达 | 第26-27页 |
| ·pGEX-eDR5诱导表达条件优化 | 第27-29页 |
| ·GST-eDR5融合蛋白的包涵体与可溶性蛋白的检测 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 GST-eDR5融合蛋白的分离与纯化 | 第31-38页 |
| 1 材料和方法 | 第31-34页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·GST-eDR5融合蛋白的确认 | 第31-32页 |
| ·GST-eDR5亲和纯化 | 第32-33页 |
| ·GST-eDR5切胶纯化 | 第33-34页 |
| ·Bradford法测蛋白浓度 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白GST-eDR5的Western blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE检测亲和柱纯化的融合蛋白GST-eDR5 | 第35-36页 |
| ·纯化后的GST-eDR5的浓度测定 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 鼠抗人GST-eDR5多克隆抗体的制备与鉴定 | 第38-43页 |
| 1 材料和方法 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·鼠抗人GST-eDR5多克隆抗体的制备 | 第38-39页 |
| ·抗血清的特异性检测 | 第39页 |
| ·抗血清的效价检测 | 第39-40页 |
| ·抗人GST-eDR5血清纯化 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-42页 |
| ·抗GST-eDR5多克隆抗体的特异性检测 | 第40-41页 |
| ·抗GST-eDR5多克隆抗体的效价检测——间接ELISA法 | 第41页 |
| ·免疫共沉淀后的抗DR5血清的识别效果 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 抗人DR5多克隆抗体诱导肝癌细胞凋亡的影响 | 第43-54页 |
| 1 材料与方法 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·肝癌细胞HepG2的培养 | 第44页 |
| ·抗人DR5抗血清诱导肝癌细胞凋亡检测 | 第44-46页 |
| ·抗人DR5抗血清对正常细胞的生长抑制检测 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-52页 |
| ·抗血清处理后细胞形态的改变 | 第47-49页 |
| ·MTT法生长抑制检测 | 第49-50页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡结果 | 第50-52页 |
| ·Caspase 3的Western blot结果 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 文献综述 | 第56-68页 |
| 附录 表达载体图 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间参加的科研项目 | 第72页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第72页 |
