| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-38页 |
| 一、无脊椎动物固有免疫 | 第12-21页 |
| 1. 免疫识别 | 第13-17页 |
| ·病原相关分子模式 | 第13页 |
| ·模式识别受体 | 第13-17页 |
| ·肽聚糖识别蛋白 | 第14-15页 |
| ·革兰氏阴性菌结合蛋白 | 第15页 |
| ·硫脂蛋白 | 第15-16页 |
| ·清道夫受体 | 第16页 |
| ·硫依赖型凝集素 | 第16页 |
| ·Toll 受体 | 第16-17页 |
| ·C-型凝集素 | 第17页 |
| 2. 免疫信号的传导 | 第17-20页 |
| ·丝氨酸蛋白酶级联反应 | 第17-18页 |
| ·Toll 信号传导通路 | 第18-19页 |
| ·Imd 信号通路 | 第19-20页 |
| 3. 病原体的清除 | 第20-21页 |
| 二、C-型凝集素 | 第21-35页 |
| 1. C-型凝集素的结构特征 | 第21-22页 |
| 2. C-型凝集素的功能 | 第22-28页 |
| ·Selectins 的功能 | 第23-24页 |
| ·Collectins的功能 | 第24-26页 |
| ·Endocytic receptors的功能 | 第26-27页 |
| ·Proteoglycans 的功能 | 第27-28页 |
| 3. C-型凝集素的钙离子结合位点及其对糖结合的影响 | 第28-29页 |
| 4. 脊椎动物的C-型凝集素超家族 | 第29-32页 |
| 5. 无脊椎动物C-型凝集素 | 第32-34页 |
| 6. 软体动物中C-型凝集素 | 第34-35页 |
| 三、本研究的目的和意义 | 第35-38页 |
| 1. 本研究的目的 | 第35页 |
| 2. 本研究的意义 | 第35-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-55页 |
| 一、实验材料 | 第38-40页 |
| 1. 实验样品 | 第38页 |
| 2. 主要化学试剂与仪器设备 | 第38-40页 |
| ·主要化学试剂 | 第38页 |
| ·培养基和试剂的配置 | 第38-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 二、实验方法 | 第40-55页 |
| 1. 栉孔扇贝cDNA 文库的构建 | 第40页 |
| 2. 扇贝总RNA提取及cDNA模板第一链的合成 | 第40-42页 |
| 3. RACE技术克隆基因的3’端 | 第42页 |
| 4. 琼脂糖凝胶纯化PCR产物 | 第42-43页 |
| 5. 质粒的制备 | 第43页 |
| 6. 感受态细胞的制备、连接及转化 | 第43-44页 |
| ·感受态的制备 | 第43-44页 |
| ·连接反应 | 第44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| 7. Northern杂交 | 第44-46页 |
| 8. QRT-PCR检测目的基因的表达 | 第46-47页 |
| 9. 毕赤酵母重组表达 | 第47-49页 |
| ·重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·转化及整合 | 第47-48页 |
| ·PCR法分析毕赤酵母整合 | 第48页 |
| ·高拷贝重组子的筛选 | 第48-49页 |
| ·重组产物的诱导表达 | 第49页 |
| 10. 原核重组表达 | 第49-52页 |
| ·重组表达载体 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的纯化与复性 | 第51页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第52页 |
| 11. 抑菌实验 | 第52页 |
| 12. 凝集实验 | 第52-54页 |
| 13. 目的基因的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第55-63页 |
| 一、实验结果 | 第55-60页 |
| 1. 栉孔扇贝CfLec-2基因的克隆 | 第55页 |
| 2. 栉孔扇贝CfLec-2基因的核苷酸序列分析 | 第55-56页 |
| 3. 栉孔扇贝CfLec-2基因的同源性分析 | 第56-58页 |
| 4. CfLec-2 的原核重组表达、纯化 | 第58-59页 |
| 5. 抑菌活性 | 第59页 |
| 6. 凝集活性 | 第59-60页 |
| 二、讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 结论 | 第63-64页 |
| 第五章 硕士期间进行的其他工作——中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2 的克隆和分析 | 第64-73页 |
| 一、研究背景 | 第64页 |
| 二、实验方法 | 第64-66页 |
| 1. 应激实验样品和样品处理 | 第64-65页 |
| 2. cDNA文库构建和序列分析 | 第65页 |
| 3. 3'RACE扩增 | 第65页 |
| 4. QRT-PCR检测目的基因表达 | 第65-66页 |
| 5. 重组质粒的构建 | 第66页 |
| 6. 重组表达载体转化和重组子的PCR鉴定 | 第66页 |
| 三、实验结果 | 第66-71页 |
| 1. 中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2基因的克隆 | 第66页 |
| 2. 中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2基因的核苷酸序列分析 | 第66-68页 |
| 3. 中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2基因的同源性和进化分析 | 第68-69页 |
| 4. 中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2基因的组织分布 | 第69-70页 |
| 5. 用实时定量PCR 检测鳗弧菌刺激下Crustin-1基因的时序表达 | 第70-71页 |
| 6. 中华绒螯蟹Crustin-1, Crustin-2 的真核重组表达 | 第71页 |
| 四、讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 硕士学位期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
