| 缩略词表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-35页 |
| ·胸腺素α1（Tα1） | 第12-18页 |
| ·胸腺素的发现 | 第12-14页 |
| ·Tα1 的生物学功能 | 第14-16页 |
| ·Tα1 的临床应用 | 第16-18页 |
| ·Tα1 的制备 | 第18页 |
| ·蛋白质/多肽的N-末端乙酰化修饰 | 第18-23页 |
| ·N-末端乙酰化修饰的意义 | 第18-19页 |
| ·蛋白质N-末端乙酰化修饰的结构需求 | 第19-20页 |
| ·N-末端乙酰化转移酶 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌细胞内蛋白质的N-末端乙酰化修饰 | 第22-23页 |
| ·基因工程方法制备低分子量多肽 | 第23-30页 |
| ·融合蛋白的化学切割 | 第23页 |
| ·特异性蛋白酶切割 | 第23-24页 |
| ·Intein介导的切割 | 第24-28页 |
| ·分泌表达 | 第28-30页 |
| ·质谱分析技术及其在蛋白质研究中的应用 | 第30-34页 |
| ·MALDI-TOF-MS | 第30-31页 |
| ·ESI-MS和ESI-MS/MS | 第31-32页 |
| ·质谱分析样品的制备 | 第32页 |
| ·质谱分析在蛋白质结构研究中的应用 | 第32-34页 |
| ·本课题的研究思路 | 第34-35页 |
| ·如何在大肠杆菌内实现Tα1 的乙酰化修饰 | 第34页 |
| ·如何切割融合蛋白获得N-末端乙酰化的Tα1 | 第34-35页 |
| 第二章 胸腺素α1（Tα1）的融合表达研究 | 第35-55页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·方法 | 第37-44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·Tα1 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第44页 |
| ·在大肠杆菌中表达的Tα1 融合蛋白存在N-末端乙酰化修饰 | 第44-47页 |
| ·讨论 | 第47-55页 |
| ·Tα1 表达载体的构建 | 第47-50页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第50页 |
| ·质谱分析样品的制备 | 第50-51页 |
| ·利用质谱分析技术确定乙酰化修饰位点 | 第51-52页 |
| ·异源蛋白在大肠杆菌表达的乙酰化修饰 | 第52-55页 |
| 第三章 修饰Tα1 的N-末端乙酰转移酶的筛选与确证 | 第55-68页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·Tα1-Gly-L12 融合蛋白（A22）在rimJ敲除菌内表达时不存在乙酰化修饰 | 第61-63页 |
| ·A22 融合蛋白与RimJ在敲除菌内共表达可获得充分乙酰化修饰 | 第63页 |
| ·RimJ可体外乙酰化修饰A22 融合蛋白 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-68页 |
| ·影响Red同源重组效率的因素 | 第64-65页 |
| ·决定Tα1 乙酰化修饰的NAT | 第65-68页 |
| 第四章 利用Intein介导的切割技术制备Tα1 | 第68-86页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-76页 |
| ·结果 | 第76-82页 |
| ·AS、AP和AM等融合蛋白的表达 | 第76-77页 |
| ·温度对AS、AP和AM等融合蛋白切割的影响 | 第77-78页 |
| ·DTT诱导AS、AP和AM等融合蛋白的切割 | 第78-79页 |
| ·融合蛋白AS硫解切割产物的纯化和质谱分析 | 第79-82页 |
| ·讨论 | 第82-86页 |
| ·Intein对切割效率的影响 | 第82-84页 |
| ·切割过程中Tα1 的C末端Asn残基脱水机理分析 | 第84页 |
| ·未来发展 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 附录 | 第97-108页 |
| 附录2-1 Tβ4 与L12 融合蛋白的序列及其在大肠杆菌中表达产物的Q-TOF MS分析 | 第97-98页 |
| 附录3-1 大肠杆菌基因组上已知和推测具有N-末端乙酰转移酶活性的相关基因及其上下游DNA序列 | 第98-101页 |
| 附录3-2 在不同菌株中表达的重组融合蛋白A22 的Q-TOF MS分析 | 第101-104页 |
| 附录3-3 Rim J催化非乙酰化A22 融合蛋白的体外修饰实验，利用Q-TOF MS测定A22 融合蛋白的分子量 | 第104-106页 |
| 附录4-1 图4-10 中峰1 和峰2 串联质谱测序图 | 第106-108页 |
| 蛋白质剪接研究进展 | 第108-127页 |
| 个人简历 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
