| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 动物细胞体外培养研究进展 | 第12-15页 |
| 2 小肠上皮细胞结构及其分离培养 | 第15-17页 |
| 3 SV40 与细胞永生化 | 第17-20页 |
| 4 本论文研究的内容及意义 | 第20-21页 |
| 试验部分 | 第21-46页 |
| 第一章 pcDNA3(-)SVT真核表达载体的构建及鉴定 | 第21-31页 |
| 1 材料与方法 | 第21-27页 |
| ·试验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-27页 |
| ·SV40 T 基因片段的制备 | 第23-24页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.0 的改造 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pcDNA3(-)SVT 的构建 | 第25-26页 |
| ·感受态宿主菌的制备 | 第26页 |
| ·质粒的转化 | 第26页 |
| ·正向重组质粒的筛选 | 第26-27页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·pGEM-LT 质粒的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·pcDNA3.0 质粒的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·连接产物正向克隆的筛选 | 第27-28页 |
| ·重组pcDNA3(-)/SVT 克隆的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·SV40 T 基因片段的序列测定 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 第二章 小鼠小肠上皮细胞的体外培养 | 第31-40页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·试验材料 | 第31-32页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·试验试剂 | 第31页 |
| ·培养用液 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-34页 |
| ·小鼠 IEC 的分离 | 第32页 |
| ·小鼠 IEC 的纯化 | 第32页 |
| ·小鼠 IEC 的传代 | 第32-33页 |
| ·细胞生长曲线的绘制 | 第33页 |
| ·形态学检查 | 第33页 |
| ·小鼠 IEC 的免疫组化鉴定 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-36页 |
| ·小鼠 IEC 的分离 | 第34页 |
| ·小鼠 IEC 的纯化 | 第34-35页 |
| ·小鼠 IEC 的传代 | 第35页 |
| ·小鼠 IEC 生长曲线的绘制 | 第35-36页 |
| ·小鼠 IEC 的形态学检查 | 第36页 |
| ·小鼠 IEC 的免疫组化鉴定 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| ·小鼠 IEC 的分离 | 第36-37页 |
| ·小鼠 IEC 的纯化 | 第37页 |
| ·小鼠 IEC 的传代 | 第37-38页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第38页 |
| ·生长基质与血清浓度 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 SV40T基因的导入及其在小鼠小肠上皮细胞中的表达 | 第40-46页 |
| 1 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·试验材料 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·试验方法 | 第40-42页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·重组质粒的制备 | 第40-41页 |
| ·脂质体介导转染 | 第41页 |
| ·PCR 检测转染细胞 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR 检测转染细胞 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-44页 |
| ·报告基因检测转染效率 | 第42页 |
| ·转染细胞基因组 DNA PCR 扩增结果 | 第42-43页 |
| ·转染细胞基因组SV40 T mRNA RT-PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 结论与研究展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57页 |
