英汉缩略语名词对照 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
论文正文:RNA 干扰核糖核酸酶抑制因子表达对膀胱癌BIU-87 细胞侵袭和转移的影响 | 第13-40页 |
前言 | 第13-15页 |
第一部分 RI siRNA 干扰重组表达载体的构建与鉴定 | 第15-22页 |
1 材料和方法 | 第15-20页 |
·材料 | 第15-16页 |
·表达载体、菌株 | 第15页 |
·细菌培养及分子克隆相关试剂 | 第15页 |
·主要仪器 | 第15页 |
·溶液的制备 | 第15-16页 |
·实验方法 | 第16-20页 |
·RI 基因特异性siRNA 设计 | 第17页 |
·RI siRNA 表达重组质粒的构建 | 第17-18页 |
·DH5α感受态细菌的制备以及连接产物的转化 | 第18-19页 |
·重组质粒的提取 | 第19页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第19页 |
·重组质粒的测序鉴定 | 第19-20页 |
2 实验结果 | 第20-21页 |
·pGenesil-1 的单酶切鉴定 | 第20-21页 |
·重组质粒的DNA 测序鉴定 | 第21页 |
3 结论 | 第21-22页 |
第二部分 RI siRNA 真核表达质粒对BIU-87 细胞中RI 基因表达的抑制 | 第22-32页 |
1 材料和方法 | 第22-28页 |
·材料 | 第22-24页 |
·菌株和细胞 | 第22页 |
·细胞培养和抗体相关相关试剂 | 第22页 |
·其它试剂 | 第22页 |
·细胞培养用试剂配制 | 第22-23页 |
·核酸分析用试剂配制 | 第23页 |
·蛋白分析用试剂配制 | 第23-24页 |
·主要仪器与设备 | 第24页 |
·实验方法 | 第24-28页 |
·人膀胱癌BIU-87 细胞的培养 | 第24页 |
·重组质粒的去内毒素处理和细胞转染 | 第24页 |
·新霉素抗性筛选稳定转染细胞 | 第24-25页 |
·Trizol 提取细胞总RNA | 第25-26页 |
·RT-PCR 一步法进行逆转录和PCR 反应 | 第26页 |
·Western 检测RI 蛋白表达 | 第26-27页 |
·免疫细胞化学 | 第27页 |
·统计学分析 | 第27-28页 |
2 实验结果 | 第28-31页 |
·转染后荧光观察和稳定细胞株的筛选 | 第28-29页 |
·RI mRNA 表达水平变化 | 第29页 |
·RI 蛋白表达水平变化 | 第29-30页 |
·免疫细胞化学分析 | 第30-31页 |
3 结论 | 第31-32页 |
第三部分 RI siRNA 对BIU-87 细胞的黏附、迁移和侵袭等生物学特性的影响 | 第32-40页 |
1 材料与方法 | 第32-34页 |
·材料 | 第32页 |
·细胞及细胞培养试剂 | 第32页 |
·抗体试剂 | 第32页 |
·其它试剂 | 第32页 |
·主要仪器与设备 | 第32页 |
·实验方法 | 第32-34页 |
·细胞形态观察 | 第32-33页 |
·细胞黏附能力检测 | 第33页 |
·细胞迁移能力检测 | 第33页 |
·侵袭能力检测 | 第33页 |
·MMP-2 MMP-9 蛋白表达的检测 | 第33页 |
·细胞骨架微丝的荧光分析观察 | 第33-34页 |
·统计学分析 | 第34页 |
2 实验结果 | 第34-38页 |
·细胞的形态学改变 | 第34页 |
·黏附能力改变 | 第34-35页 |
·迁移能力改变 | 第35-36页 |
·侵袭能力改变 | 第36-37页 |
·基质金属基质酶 MMP-2、MMP-9 表达变化 | 第37-38页 |
·细胞骨架微丝的变化 | 第38页 |
3 结论 | 第38-40页 |
讨论 | 第40-43页 |
参考文献 | 第43-46页 |
文献综述 | 第46-53页 |
致谢 | 第53-54页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |