| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-29页 |
| ·材料 | 第15-20页 |
| ·质粒和菌株 | 第15-17页 |
| ·主要实验设备 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-29页 |
| ·大肠杆菌的培养与保藏 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第21-22页 |
| ·质粒的提取(CTAB法) | 第22-23页 |
| ·PCR扩增 | 第23页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第23-24页 |
| ·DNA的粘末端补平 | 第24页 |
| ·凝胶电泳法检测DNA | 第24页 |
| ·DNA的纯化 | 第24-25页 |
| ·DNA连接反应 | 第25-26页 |
| ·线状DNA的去磷酸化 | 第26页 |
| ·细胞的复苏、传代与冻存 | 第26-27页 |
| ·细胞计数 | 第27页 |
| ·细胞转染 | 第27-29页 |
| 第三章 载脂蛋白A-I启动子调控的肝靶向性载体的构建与鉴定 | 第29-39页 |
| ·实验材料与试剂 | 第29页 |
| ·肝靶向性重组质粒pAE的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的SMMC-7221细胞转染条件的优化 | 第30-31页 |
| ·MTT检测 | 第30页 |
| ·细胞接种数目的影响 | 第30页 |
| ·N/P比的影响 | 第30页 |
| ·血清的影响 | 第30页 |
| ·抗生素的影响 | 第30-31页 |
| ·重组载体转染细胞 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-36页 |
| ·pEGFP的鉴定 | 第31页 |
| ·apoA-Ⅰ基因启动子的PCR扩增结果 | 第31-32页 |
| ·肝靶向性真核表达载体pAE的鉴定 | 第32-33页 |
| ·转染条件的优化结果 | 第33-34页 |
| ·apoA-Ⅰ基因启动子转录活性鉴定 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| 第四章 肝靶向性RNAi载体的构建与鉴定 | 第39-49页 |
| ·实验材料与试剂 | 第39-40页 |
| ·CMV启动子调控的shRNA-EGFP表达质粒的构建及其结构修饰 | 第40页 |
| ·肝靶向RNAi载体构建及其活性检测 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-47页 |
| ·RNAi载体的酶切测序验证结果 | 第41-45页 |
| ·RNAi载体的细胞转染结果 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 shRNA碱基缺失对Pol Ⅱ启动子调控的RNAi的影响 | 第49-53页 |
| ·实验材料与试剂 | 第49页 |
| ·CMV启动子调控的shRNA-EGFP基因缺失表达质粒的构建及活性鉴定 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-52页 |
| ·pENB-Dsh中shRNA-EGFPq示意图 | 第50页 |
| ·碱基缺失的pENB-Dshq的酶切测序验证结果 | 第50-51页 |
| ·碱基缺失的pENB-Dshq的细胞转染结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第六章 双基因RNA干扰载体的构建及活性分析 | 第53-59页 |
| ·实验材料与试剂 | 第53页 |
| ·双基因表达载体的构建 | 第53页 |
| ·双基因表达载体转染肝癌细胞 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·双基因RNAi载体构建示意图 | 第54-55页 |
| ·重组载体的酶切验证 | 第55-56页 |
| ·重组载体转染肝癌细胞结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第七章 结论 | 第59-60页 |
| 综述 | 第60-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 攻读学位期间发表文章及参与课题研究 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
