提要 | 第1-7页 |
第一篇 前言 | 第7-23页 |
第一章 背景知识 | 第7-20页 |
第一节 细胞凋亡概述 | 第7页 |
第二节 细胞凋亡通路及相关分子 | 第7-15页 |
第三节 Cyclin A-Cdk2 概述 | 第15-18页 |
第四节 紫杉醇的研究进展 | 第18-20页 |
第二章 论文的研究目的和设计思路 | 第20-23页 |
第一节 论文的研究目的 | 第20-21页 |
第二节 论文设计思路 | 第21-23页 |
第二篇 材料与方法 | 第23-30页 |
第一章 材料与试剂 | 第23-24页 |
一、菌株和细胞株 | 第23页 |
二、试剂和酶类 | 第23页 |
三、抗体 | 第23页 |
四、主要溶液 | 第23-24页 |
第二章 实验方法 | 第24-30页 |
一、细胞培养 | 第24页 |
二、全细胞裂解液的制备 | 第24-25页 |
三、线粒体及胞浆蛋白质的分离和制备 | 第25-26页 |
四、BCA法测定蛋白质浓度 | 第26页 |
五、体外Caspase活力测定 | 第26页 |
六、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE Assay) | 第26页 |
七、免疫印迹分析 | 第26-27页 |
八、DNA转染 | 第27-28页 |
九、MitoCapture 染色测线粒体膜电位 | 第28页 |
十、质粒构建 | 第28-29页 |
十一、GST融合蛋白的表达和纯化 | 第29-30页 |
十二、体外磷酸化实验 | 第30页 |
十三、免疫共沉淀 | 第30页 |
第三篇 结果与讨论 | 第30-52页 |
第一章 Paclitaxel诱导HeLa细胞凋亡中Cdk2 的作用机制研究 | 第30-39页 |
第一节 Cyclin A-Cdk2 在 Paclitaxel 诱导 HeLa 细胞凋亡过程中的必要性 | 第30-35页 |
第二节 Cyclin A-Cdk2 调控线粒体膜通透性变化 | 第35-38页 |
第三节 小结 | 第38-39页 |
第二章 Cyclin A-Cdk2 细胞凋亡特异性底物的筛选 | 第39-44页 |
第一节 Bid、Bad、Bik、Bmf、BimS基因的克隆、表达及融合蛋白的纯化 | 第39-42页 |
第二节 对Bid、Bad、Bik、Bmf、BimS的体外激酶实验 | 第42-43页 |
第三节 小结 | 第43-44页 |
第三章 Cyclin A-Cdk2 磷酸化Bad调控细胞凋亡机制的研究 | 第44-52页 |
第一节 Cyclin A-Cdk2 磷酸化Bad第91 位丝氨酸 | 第44-48页 |
第二节 Bad蛋白质91 位丝氨酸的磷酸化增强其促凋亡活性 | 第48-51页 |
第三节 小结 | 第51-52页 |
结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-65页 |
攻读博士学位期间发表论文 | 第65-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
中文摘要 | 第67-70页 |
Abstract | 第70-73页 |
缩略语 | 第73-74页 |