人PPPDE1基因的定点诱变及其细胞生物学功能研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| ·立题背景 | 第12-13页 |
| ·综述 | 第13-21页 |
| ·细胞凋亡 | 第13-17页 |
| ·细胞凋亡的形态学和生化特征 | 第13-14页 |
| ·细胞凋亡的过程 | 第14页 |
| ·凋亡的信号传导 | 第14-16页 |
| ·细胞周期与细胞凋亡 | 第16-17页 |
| ·化疗药物与细胞凋亡 | 第17页 |
| ·高尔基体的研究进展 | 第17-19页 |
| ·高尔基体的形态结构 | 第17-18页 |
| ·高尔基体的功能 | 第18页 |
| ·高尔基体的形成 | 第18-19页 |
| ·PPPDE1基因研究进展 | 第19-21页 |
| ·PPPDE1基因研究现状 | 第19-20页 |
| ·猪PPPDE1基因的研究现状 | 第20-21页 |
| ·研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第2章 PPPDE1基因结构的生物学分析 | 第22-31页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-23页 |
| ·主要数据库及软件 | 第22页 |
| ·功能域分析 | 第22页 |
| ·信号肽预测 | 第22页 |
| ·跨膜预测 | 第22页 |
| ·二级结构预测 | 第22-23页 |
| ·活性位点预测 | 第23页 |
| ·表达信息整理 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-28页 |
| ·功能域分析结果 | 第23-24页 |
| ·PPPDE1物种间保守性分析 | 第24-25页 |
| ·信号肽预测结果 | 第25页 |
| ·跨膜预测结果 | 第25-26页 |
| ·二级结构 | 第26页 |
| ·活性位点预测结果 | 第26-27页 |
| ·表达信息整理结果 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第3章 PPPDE1及其诱变型的生物学特性研究 | 第31-57页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料 | 第31-35页 |
| ·主要实验仪器 | 第31页 |
| ·主要实验试剂及耗材 | 第31-32页 |
| ·人cDNA样品 | 第32页 |
| ·细胞和载体 | 第32-33页 |
| ·主要培养基 | 第33页 |
| ·其它试剂配置 | 第33-35页 |
| ·分子检测试剂 | 第33-34页 |
| ·A549细胞培养及表达试剂 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第34-35页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第35页 |
| ·主要分子生物学软件及网站 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-43页 |
| ·人PPPDE1基因的克隆及诱变 | 第35-39页 |
| ·人总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·反转录 | 第36页 |
| ·PPPDE1基因的定点诱变 | 第36-38页 |
| ·PPPDE1及其诱变片段的转化克隆 | 第38-39页 |
| ·真核表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·细胞定位载体的构建 | 第39页 |
| ·过表达及原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·PPPDE1及PPPDE1(M)亚细胞定位 | 第40-41页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·用脂质体法进行细胞转染 | 第40页 |
| ·转染后的细胞染色和融合蛋白的观察 | 第40页 |
| ·细胞冻存 | 第40-41页 |
| ·MTT试验 | 第41页 |
| ·细胞计数 | 第41页 |
| ·细胞毒性检测 | 第41页 |
| ·原核表达纯化 | 第41-43页 |
| ·原核诱导表达 | 第41-42页 |
| ·蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·Pull-down实验 | 第43页 |
| ·细胞蛋白的粗提 | 第43页 |
| ·作蛋白的钓取 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-53页 |
| ·PPPDE1野生型及突变型的克隆转化 | 第43-47页 |
| ·U937细胞总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·U937细胞总RNA的反转录 | 第44页 |
| ·克隆转化 | 第44-47页 |
| ·载体的构建 | 第47-48页 |
| ·亚细胞定位结果 | 第48-49页 |
| ·MTT试验 | 第49-50页 |
| ·Pull-down实验 | 第50-53页 |
| ·PPPDE1-GST的原核表达 | 第50页 |
| ·PPPDE1-GST的纯化 | 第50-51页 |
| ·PPPDE1野生型及突变型互作蛋白的钓取 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·突变位点分析 | 第53页 |
| ·亚细胞定位结果分析 | 第53-54页 |
| ·过表达研究分析 | 第54页 |
| ·Pull-down试验结果分析 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-57页 |
| ·本研究获得的主要成果 | 第55页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第55页 |
| ·本研究的不足之处 | 第55-56页 |
| ·下一步的研究思路 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录一 | 第63-64页 |
| 附录二 | 第64-66页 |
| 附录三 | 第66页 |
