| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 1 引言 | 第16-36页 |
| ·绵羊肺腺瘤概述 | 第16页 |
| ·绵羊肺腺瘤病流行病学 | 第16-18页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的发现与分布 | 第16-17页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的流行特征 | 第17-18页 |
| ·OPA 的传染源及传播途径 | 第18页 |
| ·OPA 易感动物 | 第18页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的病原学 | 第18-25页 |
| ·病原的确定 | 第18-19页 |
| ·JSRV 的分类地位 | 第19-20页 |
| ·JSRV 的形态及理化性质 | 第20页 |
| ·JSRV 的组织嗜性 | 第20-21页 |
| ·JSRV 的抗原性 | 第21页 |
| ·JSRV 基因组结构及其编码的蛋白 | 第21-24页 |
| ·JSRV 的复制及其生活周期 | 第24-25页 |
| ·JSRV 的受体 | 第25-26页 |
| ·JSRV 内源性病毒 | 第26-28页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的发病机理 | 第28-32页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的临床症状与病理变化 | 第32页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的诊断 | 第32-33页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的防制 | 第33页 |
| ·绵羊肺腺瘤病与人的细支气管肺泡癌 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第34-36页 |
| 2 实验一 JSRV 衣壳蛋白单克隆抗体的免疫学鉴定 | 第36-48页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-40页 |
| ·菌株、表达载体和质粒 | 第37页 |
| ·试剂与药品 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·真核表达蛋白鉴定McAb | 第38页 |
| ·杂交瘤细胞分泌稳定性检测 | 第38页 |
| ·ELISA 相加法预测McAb 识别表位 | 第38页 |
| ·重叠短肽的引物设计 | 第38-39页 |
| ·JSRV 衣壳蛋白基因的PCR 分段扩增 | 第39页 |
| ·转化获取阳性表达菌 | 第39页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞培养液上清的获得 | 第40页 |
| ·表达蛋白的Western blot 分析 | 第40页 |
| ·非竞争性ELISA 法测定三株单抗的功能性亲和常数 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-46页 |
| ·杂交瘤细胞筛选及分泌稳定性检测 | 第40-41页 |
| ·ELISA 相加法预测McAb 识别表位 | 第41-42页 |
| ·真核表达蛋白对McAb 进行鉴定 | 第42-43页 |
| ·ca 基因的分段扩增 | 第43-44页 |
| ·阳性表达菌的PCR 鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒的测序 | 第44页 |
| ·CA 蛋白的分段表达 | 第44-45页 |
| ·三株单抗Western blot 表位鉴定 | 第45-46页 |
| ·三株单抗的抗原抗体结合反应曲线及抗体亲和常数的推导 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 3 实验二 绵羊肺腺瘤病阻断ELISA 诊断方法的初步建立 | 第48-57页 |
| 摘要 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·样品的来源及处理 | 第49页 |
| ·试剂及其配制 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·抗JSRV-CA 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第49-50页 |
| ·抗JSRV-CA 单克隆抗体的纯化 | 第50页 |
| ·重组JSRV-CA 蛋白的表达与纯化 | 第50页 |
| ·样品的处理 | 第50-51页 |
| ·阻断ELISA 方法的建立 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·单克隆抗体的亚型鉴定 | 第52页 |
| ·辛酸-硫酸铵法纯化腹水的电泳鉴定 | 第52页 |
| ·重组 JSRV-CA 蛋白纯化 | 第52-53页 |
| ·阻断ELISA 方法的建立 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 4 实验三 绵羊肺腺瘤病特异性PCR 及套式PCR 诊断方法的建立 | 第57-67页 |
| 摘要 | 第57-58页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·样品的来源及处理 | 第58-59页 |
| ·常用试剂 | 第59页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第60页 |
| ·特异性PCR 及套式PCR 的建立 | 第60-61页 |
| ·临床样品的检测 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·标准LTR 序列的扩增 | 第61-62页 |
| ·标准LTR的序列测定 | 第62页 |
| ·重复性试验 | 第62页 |
| ·特异性PCR 及套式PCR 扩增的敏感性 | 第62页 |
| ·临床样品的检测 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 5 实验四 羊Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及鉴定 | 第67-74页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68-70页 |
| ·动物和试剂 | 第68页 |
| ·细胞分离液及培养液配方 | 第68-69页 |
| ·肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离 | 第69页 |
| ·分离纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞 | 第69-70页 |
| ·肺泡Ⅱ型上皮细胞培养 | 第70页 |
| ·细胞鉴定 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-72页 |
| ·IgG 黏附及贴壁选择法 | 第70页 |
| ·磁化树脂微粒法 | 第70页 |
| ·细胞染色结果 | 第70-72页 |
| ·细胞产量和纯度 | 第72页 |
| ·原代培养观察 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 6 实验五 enJSRV LTR 和exJSRV LTR 克隆与序列分析 | 第74-87页 |
| 摘要 | 第74-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-77页 |
| ·样品的来源及处理 | 第75页 |
| ·常用试剂 | 第75页 |
| ·引物设计 | 第75-76页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第76页 |
| ·内外源性LTR 的PCR 扩增 | 第76-77页 |
| ·目的片段的克隆及序列分析 | 第77页 |
| ·重组PCR 法扩增全长外源性LTR | 第77页 |
| ·结果 | 第77-84页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第77页 |
| ·enJSRV/exJSRV LTR 的结构分析 | 第77-81页 |
| ·enJSRV/exJSRV LTR序列同源性及系统进化树分析 | 第81-82页 |
| ·enJSRV/exJSRV LTR细胞转录因子结合位点分析 | 第82-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 7 实验六 JSRV LTR 致瘤机制的相关性研究 | 第87-99页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| ·材料 | 第88-89页 |
| ·质粒 | 第88-89页 |
| ·试剂 | 第89页 |
| ·仪器 | 第89页 |
| ·细胞 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-92页 |
| ·pGL-LTR质粒构建 | 第89-90页 |
| ·重组PCR 法构建pGL-EXLTR 突变质粒 | 第90-91页 |
| ·转染质粒定量 | 第91页 |
| ·enJSRV/exJSRV LTR 转染细胞 | 第91页 |
| ·突变质粒启动子活性比较 | 第91页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第91-92页 |
| ·结果 | 第92-96页 |
| ·pGL-LTR 质粒的酶切鉴定 | 第92-93页 |
| ·pGL-EXLTR 突变质粒的重组PCR | 第93页 |
| ·enJSRV/exJSRV LTR启动子活性比较 | 第93-95页 |
| ·突变exJSRV LTR 启动子活性比较 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| 8 总体结论 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-114页 |
| 作者简介 | 第114页 |
