| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-26页 |
| 1. SATB1作为染色质组织者调节染色质高级构象和成簇基因的表达 | 第11-14页 |
| ·染色质高级构象是真核基因表达调控的一个重要层面 | 第11-12页 |
| ·核基质结合区和核基质结合蛋白的重要作用 | 第12-13页 |
| ·SATB1作为重要的核基质结合蛋白在染色质高级构象形成中起组织作用 | 第13-14页 |
| 2. SATB1通过调控β-珠蛋白基因簇的染色质高级构象调节β-珠蛋白基因的表达 | 第14-19页 |
| ·β-珠蛋白基因簇的结构和表达特点 | 第14-15页 |
| ·染色质高级构象是调控β-珠蛋白基因簇基因表达的重要方面 | 第15-16页 |
| ·SATB1通过募集组蛋白修饰酶CBP调节β-珠蛋白基因簇基因的表达 | 第16-17页 |
| ·SATB1在细胞核水平介导β-珠蛋白基因簇定位于核基质区域 | 第17页 |
| ·SATB1介导β-珠蛋白基因簇内核基质结合区的相互作用参与活性染色质的形成 | 第17-19页 |
| 3. SATB1的翻译后修饰促进其对下游基因的精确调控 | 第19-21页 |
| ·翻译后修饰精确调控蛋白因子的功能 | 第19-20页 |
| ·SATB1的翻译后修饰促进其对下游基因的精确调控 | 第20页 |
| ·K562细胞用Hemin诱导向红系分化过程中SATB1的乙酰化修饰水平下降 | 第20-21页 |
| 4. SIRT1通过去乙酰化多种靶蛋白发挥功能 | 第21-23页 |
| ·SIRT1在多种生理过程中发挥功能 | 第21页 |
| ·SIRT1通过去乙酰化各种靶蛋白发挥功能 | 第21-22页 |
| ·S1RT1可在NAD~+存在的情况下对底物进行去乙酰化修饰 | 第22-23页 |
| 5. 本研究的理论问题与主要内容 | 第23-26页 |
| ·本研究的理论问题 | 第23-24页 |
| ·本研究的主要内容 | 第24-26页 |
| 材料与方法 | 第26-48页 |
| 1. 实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·细胞系 | 第26页 |
| ·限制性内切酶及修饰酶 | 第26页 |
| ·抗体 | 第26-27页 |
| ·其它主要试剂和材料 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2. 实验方法 | 第28-48页 |
| ·基本技术路线 | 第28页 |
| ·细菌操作与质粒的转化 | 第28-30页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5-α制备 | 第28-29页 |
| ·质粒的转化 | 第29页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第29-30页 |
| ·细胞培养 | 第30-31页 |
| ·细胞的生长条件 | 第30页 |
| ·细胞的传代 | 第30页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第30-31页 |
| ·K562细胞的红系诱导和检测 | 第31页 |
| ·K562细胞向红系分化的诱导 | 第31页 |
| ·K562细胞红系分化的检测 | 第31页 |
| ·细胞的转染,逆转录病毒的包装和混合细胞株筛选 | 第31-33页 |
| ·实时定量PCR | 第33-34页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第33页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| ·real-time PCR检测 | 第33-34页 |
| ·Western-Blotting | 第34-37页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第34页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第34-35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35页 |
| ·胶的制备 | 第35页 |
| ·样品的制备和上样 | 第35页 |
| ·电泳 | 第35页 |
| ·转膜 | 第35-36页 |
| ·抗原抗体反应 | 第36页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白 | 第36-37页 |
| ·染色质免疫沉淀(ChIP) | 第37-40页 |
| ·细胞培养 | 第37页 |
| ·细胞固定 | 第37-38页 |
| ·细胞核的提取 | 第38页 |
| ·细胞核的裂解与超声处理 | 第38页 |
| ·超声结果的分析 | 第38页 |
| ·免疫沉淀 | 第38-39页 |
| ·DNA的分离及纯化 | 第39页 |
| ·PCR反应检测 | 第39-40页 |
| ·蛋白质免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·细胞培养 | 第40-41页 |
| ·细胞裂解 | 第41页 |
| ·免疫沉淀 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE | 第41页 |
| ·休外乙酰化和去乙酰化反应 | 第41-44页 |
| ·染色质构象捕获(3C) | 第44-48页 |
| ·交联固定的细胞核的制备 | 第44页 |
| ·细胞裂解与细胞核的分离 | 第44-45页 |
| ·台盼蓝染色检测细胞裂解情况 | 第45页 |
| ·非特异结合蛋白的洗脱与SDS的中和 | 第45页 |
| ·细胞核的保存 | 第45页 |
| ·细胞核内染色质DNA的限制性内切酶消化与鉴定 | 第45-46页 |
| ·交联固定的染色质复合物内DNA分子的连接 | 第46页 |
| ·连接产物DNA的制备与定量 | 第46-48页 |
| 实验结果 | 第48-69页 |
| 1. SATB1与SIRT1相互作用 | 第48-52页 |
| ·SATB1和SIRT1之间存在蛋白质相互作用 | 第48-52页 |
| ·外源SATB1和SIRT1蛋白相互作用 | 第48-50页 |
| ·内源SATB1和SIRT1蛋白相互作用 | 第50-52页 |
| ·SATB1和SIRT1蛋白共定位 | 第52页 |
| 2. SIRT1去乙酰化SATB1 | 第52-57页 |
| ·SIRT1的抑制剂NAM增加而激活剂Resveratrol降低SATB1乙酰化水平 | 第52-54页 |
| ·SIRT1体外去乙酰化SATB1 | 第54-55页 |
| ·SIRT1过表达降低SATB1乙酰化水平 | 第55-56页 |
| ·SIRT1体外去乙酰化SATB1第136位和第175位赖氨酸 | 第56-57页 |
| 3. SIRT1促进ε-珠蛋白基因的表达 | 第57-66页 |
| ·在K562细胞中SIRT1促进ε-珠蛋白基因表达 | 第57-60页 |
| ·K562细胞中SIRT1激活剂Resveratrol促进ε-珠蛋白基因表达 | 第57-58页 |
| ·K562细胞中SIRT1抑制剂NAM抑制ε-珠蛋白基因表达 | 第58页 |
| ·K562细胞中过表达SIRT1促进ε-珠蛋白基因表达 | 第58-59页 |
| ·K562细胞中干扰SIRT1降低ε-珠蛋白基因表达 | 第59-60页 |
| ·在原代红系细胞中SIRT1促进ε-珠蛋白基因表达 | 第60-62页 |
| ·原代红系细胞中SIRT1激活剂Resveratrol促进而抑制剂NAM抑制ε-珠蛋白基因表达 | 第60-61页 |
| ·原代红系细胞中SIRT1干扰降低ε-珠蛋白基因表达 | 第61-62页 |
| ·SIRT1的激活剂和抑制剂对ε-珠蛋白基因表达的调节依赖SATB1的PDZ区域 | 第62-63页 |
| ·Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中SIRT1促进ε-珠蛋白基因的表达 | 第63-66页 |
| ·Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中SIRT1蛋白表达量增加 | 第63-64页 |
| ·Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中SIRT1在MAR~(HS2)和MAR~ε上的结合增强 | 第64-65页 |
| ·SIRT1干扰影响Hemin诱导的ε-珠蛋白基因表达 | 第65-66页 |
| 4. S1RT1促进SATB1介导的核基质结合区间的相互作用 | 第66-69页 |
| ·干扰SIRT1减弱SATB1在MAR~(HS2)和MAR~ε上的结合 | 第66-67页 |
| ·干扰SIRT1减弱SATB1介导的MAR~(HS2)和MAR~ε之间的相互作用 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-77页 |
| 1. 本研究概述 | 第69页 |
| 2. SIRT1去乙酰化SATB1的PDZ结构域 | 第69-71页 |
| ·PDZ结构域对SATB1的染色质组织功能非常重要 | 第69-70页 |
| ·PCAF乙酰化SATB1的PDZ结构域而SIRT1对其去乙酰化 | 第70页 |
| ·SATB1的PDZ结构域的乙酰化和去乙酰化修饰调节其在MAR元件上的结合能力 | 第70-71页 |
| 3. SIRT1是一个重要的珠蛋白基因的调节因子 | 第71-73页 |
| ·本研究发现SIRT1可以调节珠蛋白基因表达 | 第71-72页 |
| ·SIRT1对珠蛋白基因表达的调节是SATB1的PDZ结构域依赖的 | 第72页 |
| ·SIRT1主要调节ε-珠蛋白基因的表达同时也轻度调节γ-珠蛋白基因的表达 | 第72-73页 |
| ·SIRT1参与了Hemin诱导的K562细胞向红系分化过程中ε-珠蛋白基因的激活 | 第73页 |
| 4. SIRT1和SATB1共同参与染色质高级构象调节 | 第73-76页 |
| ·SIRT1通过去乙酰化底物参与调节染色质高级构象 | 第73-75页 |
| ·染色质组织因子上的翻译后修饰精细调控染色质高级构象 | 第75-76页 |
| 5. 本研究不足之处和今后的工作设想 | 第76-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 文献综述 | 第82-87页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 英文名词及缩写 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简历 | 第89-90页 |
