| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 引言 | 第8页 |
| 1 文献综述 | 第8-20页 |
| ·油松雌性不育的研究进展 | 第8-11页 |
| ·植物雌性不育的发生及类型 | 第8页 |
| ·油松雌性不育的细胞学和遗传学研究 | 第8-9页 |
| ·油松雌性不育的生理生化研究 | 第9-10页 |
| ·油松雌性不育的分子机制和免疫学研究 | 第10-11页 |
| ·基因差异表达技术在木本植物研究中的应用 | 第11-15页 |
| ·差异表达基因的筛选方法及其技术原理 | 第11-13页 |
| ·mRNA差异显示PCR(differential displayPCR,DD-PCR) | 第11-12页 |
| ·代表性差异分析(representational difference analysis,RDA) | 第12页 |
| ·抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) | 第12-13页 |
| ·基因表达连续性分析(serial analysis of gene expression,SAGE) | 第13页 |
| ·基因芯片技术(DNA Microarray) | 第13页 |
| ·几种分离差异表达基因方法的优缺点 | 第13-15页 |
| ·mRNA差异显示PCR | 第13-14页 |
| ·代表性差异分析 | 第14页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第14页 |
| ·基因表达连续性分析 | 第14-15页 |
| ·DNA微阵列技术 | 第15页 |
| ·展望 | 第15页 |
| ·抑制性消减杂交的原理及其应用 | 第15-20页 |
| ·抑制性消减杂交的原理 | 第15-17页 |
| ·抑制性消减杂交的应用 | 第17-20页 |
| 2 油松胚珠总RNA的提取 | 第20-28页 |
| ·材料与方法 | 第20-23页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·试剂和仪器 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-23页 |
| ·TRIZOL法 | 第21页 |
| ·CTAB法 | 第21-22页 |
| ·CTAB改进方法 | 第22页 |
| ·Plant RNA assistant kit | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-25页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第23-24页 |
| ·紫外分光光度计检测RNA | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-28页 |
| 3 应用Super SMART cDNA合成技术扩增油松胚珠总RNA | 第28-36页 |
| ·材料和方法 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂和仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·第一条链cDNA的合成 | 第28-29页 |
| ·柱层析 | 第29页 |
| ·cDNA的长距离PCR扩增 | 第29-31页 |
| ·PCR产物纯化和质量检测 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| ·Super SMART cDNA合成技术原理及其应用 | 第33-35页 |
| ·应用Super SMART cDNA合成技术时注意的问题 | 第35-36页 |
| 4 抑制性消减杂交文库的构建 | 第36-54页 |
| ·材料和方法 | 第36-44页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-44页 |
| ·油松管家基因引物的确定 | 第36-37页 |
| ·cDNA浓缩,Rsa Ⅰ酶切 | 第37页 |
| ·酶切产物纯化及浓缩 | 第37-38页 |
| ·接头连接 | 第38-39页 |
| ·连接效率分析 | 第39-41页 |
| ·第一次消减杂交 | 第41页 |
| ·第二次消减杂交 | 第41-42页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第43页 |
| ·消减杂交效率检测 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·油松管家基因引物的确定 | 第44-46页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切结果 | 第46-47页 |
| ·接头效率检测 | 第47-48页 |
| ·两轮PCR产物结果 | 第48-49页 |
| ·消减杂交效率检测结果 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·文库建立前的准备 | 第51页 |
| ·文库建立时注意的问题 | 第51-54页 |
| 5 抑制性消减杂交文库的克隆,筛选和序列分析 | 第54-68页 |
| ·材料和方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·PCR产物纯化及浓缩 | 第54页 |
| ·连接pGEM-T载体 | 第54-55页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第55页 |
| ·菌液PCR检测 | 第55-56页 |
| ·文库克隆的序列分析 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-64页 |
| ·文库克隆质量分析 | 第56-57页 |
| ·菌液PCR检测 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的cDNA测序及同源性分析结果 | 第58-64页 |
| ·讨论 | 第64-68页 |
| ·抑制性消减杂交文库的克隆,筛选过程中所要注意的问题 | 第64-65页 |
| ·相关基因的问题 | 第65-68页 |
| 6 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 个人简介 | 第78-80页 |
| 导师简介 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
