| 本研究创新点 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 第一章 研究背景 | 第15-48页 |
| 1. septin细胞骨架的结构和功能概述 | 第15-36页 |
| ·septin蛋白的一级结构 | 第15-17页 |
| ·septin在不同物种中的分布 | 第17-19页 |
| ·septin高级结构的聚合 | 第19-28页 |
| ·septin高级结构组织的调控机制 | 第28-33页 |
| ·septin的功能 | 第33-36页 |
| 2. 酿酒酵母细胞极性的概述 | 第36-43页 |
| ·出芽位点选择 | 第36-37页 |
| ·出芽位点选择的分子机制 | 第37-39页 |
| ·轴向出芽 | 第39-41页 |
| ·双极出芽 | 第41-43页 |
| 3. 本课题研究的目的、内容和意义 | 第43-48页 |
| 第二章 Bud3p功能结构域的鉴定 | 第48-87页 |
| 1. 实验材料 | 第48-52页 |
| ·实验所用的菌株及质粒 | 第48-49页 |
| ·药品与试剂 | 第49-50页 |
| ·培养基和溶液的制备 | 第50-52页 |
| 2. 实验方法 | 第52-58页 |
| ·构建含Bud3p系列缺失片段的表达克隆 | 第52-54页 |
| ·重叠PCR方法构建突变体 | 第54-55页 |
| ·酿酒酵母的培养及显微观察 | 第55-56页 |
| ·酿酒酵母快速转化 | 第56页 |
| ·酿酒酵母芽痕染色 | 第56-57页 |
| ·酿酒酵母总蛋白的提取 | 第57页 |
| ·蛋白质印迹实验 | 第57-58页 |
| 3. 结果与分析 | 第58-80页 |
| ·Bud3p芽颈定位结构域的鉴定 | 第58-62页 |
| ·Bud3p对septin组织调节结构域的鉴定 | 第62-71页 |
| ·Bud3p膜定位结构域的鉴定 | 第71-75页 |
| ·Bud3p控制轴向出芽结构域的鉴定 | 第75-80页 |
| 4. 讨论 | 第80-86页 |
| ·Bud3p芽颈定位由多区段介导 | 第80-83页 |
| ·Bud3p对septin组织的调节作用 | 第83-84页 |
| ·双性螺旋的作用 | 第84-85页 |
| ·Bud3p的轴向出芽功能 | 第85-86页 |
| 5. 小结 | 第86-87页 |
| 第三章 Bud3p与septin相互关系的研究 | 第87-105页 |
| 1. 实验材料 | 第87-88页 |
| ·实验所用的菌株及质粒 | 第87-88页 |
| ·药品与试剂 | 第88页 |
| ·培养基和溶液的制备 | 第88页 |
| 2. 实验方法 | 第88-91页 |
| ·酿酒酵母基因的敲除及修饰 | 第88-90页 |
| ·GST pull-down实验 | 第90页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC)实验 | 第90-91页 |
| 3. 结果与分析 | 第91-101页 |
| ·Bud3p与septin在体内共定位 | 第91-92页 |
| ·Bud3p与septin的遗传相互作用研究 | 第92-95页 |
| ·Bud3p与septin体内相互作用研究 | 第95-97页 |
| ·过量表达Bud3p诱导芽体变长部分地依赖Swe1p激酶 | 第97-99页 |
| ·双分子荧光互补技术(BiFC)研究Bud3p与septin的关系 | 第99-101页 |
| 4. 讨论 | 第101-103页 |
| ·Bud3p与异常septin螺旋共定位 | 第101-102页 |
| ·Bud3p与septin亚基Cdc10p的体内相互作用 | 第102-103页 |
| ·Swe1p在Bud3p诱导芽体变长中的作用 | 第103页 |
| 5. 小结 | 第103-105页 |
| 第四章 通过遗传筛选寻找与Bud3p相互作用的蛋白质 | 第105-117页 |
| 1. 实验材料 | 第105-106页 |
| ·实验所用的菌株及质粒 | 第105-106页 |
| ·培养基和溶液的制备 | 第106页 |
| 2. 实验方法 | 第106-107页 |
| ·酿酒酵母文库转化 | 第106页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第106-107页 |
| 3. 结果与分析 | 第107-115页 |
| ·通过酵母双杂交筛选文库寻找与Bud3p相互作用的蛋白质 | 第107-109页 |
| ·Bud3p与Nis1p相互作用的研究 | 第109-111页 |
| ·其它遗传学方法筛选与Bud3p功能相关的蛋白 | 第111-115页 |
| 4. 讨论 | 第115-116页 |
| 5. 小结 | 第116-117页 |
| 研究总结与展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 在读期间已发表论文 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
