| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-14页 |
| 1 引言 | 第14-21页 |
| ·昆虫中肠围食膜的研究进展 | 第14-16页 |
| ·围食膜的种类与形成 | 第16页 |
| ·围食膜的功能 | 第16-18页 |
| ·中肠屏障 | 第16-17页 |
| ·区室化作用 | 第17页 |
| ·选择通透性 | 第17页 |
| ·其它 | 第17-18页 |
| ·围食膜在害虫生防中的作用 | 第18页 |
| ·RNAI——研究昆虫基因功能的新工具 | 第18-21页 |
| ·RNAi 研究进展 | 第18-19页 |
| ·RNAi 作用机制 | 第19页 |
| ·Argonaute 蛋白——RNAi 效应的执行者 | 第19-21页 |
| 2 棉铃虫中肠CDNA 表达文库的筛选和围食膜蛋白分析 | 第21-37页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·供试昆虫 | 第21页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 表达文库 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要培养基 | 第21-22页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)所需试剂 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 银染所需试剂 | 第22页 |
| ·Western blot 所需试剂 | 第22页 |
| ·琼脂糖电泳检测DNA 所用试剂 | 第22-23页 |
| ·CTAB 方法少量制备质粒DNA 所用试剂 | 第23页 |
| ·PAS 显色法所需试剂 | 第23页 |
| ·其它试剂 | 第23页 |
| ·常用仪器设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·棉铃虫围食膜的提取 | 第24页 |
| ·棉铃虫围食膜蛋白的制备 | 第24页 |
| ·棉铃虫围食膜蛋白抗体的Western blot 检测 | 第24-25页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 表达文库的检测 | 第25页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 表达文库的第一轮筛选 | 第25页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 表达文库的第二轮筛选 | 第25页 |
| ·单克隆切除 | 第25页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·阳性克隆的序列测定与分析 | 第26页 |
| ·围食膜蛋白糖蛋白分析 | 第26-27页 |
| ·粉纹夜蛾颗粒体病毒TnGV 的活体增殖与纯化 | 第27页 |
| ·Enhancin 对棉铃虫围食膜的处理 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-34页 |
| ·棉铃虫围食膜蛋白的提取 | 第27页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 文库滴度的测定 | 第27页 |
| ·棉铃虫围食膜蛋白总抗体的检测 | 第27-28页 |
| ·棉铃虫中肠cDNA 文库的免疫筛选 | 第28-30页 |
| ·阳性克隆的PCR 及酶切鉴定 | 第30页 |
| ·阳性克隆的测序及序列分析 | 第30-32页 |
| ·部分测序克隆序列分析 | 第32-33页 |
| ·棉铃虫围食膜糖蛋白的检测 | 第33-34页 |
| ·Enhancin 对棉铃虫围食膜的作用 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-37页 |
| 3 棉铃虫围食膜粘蛋白HM72 的分离鉴定与功能分析 | 第37-51页 |
| ·材料与方法 | 第37-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·试剂及仪器 | 第37页 |
| ·棉铃虫围食膜粘蛋白HM72 的克隆与测序分析 | 第37页 |
| ·HM72 原核表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·重组子的原核表达与鉴定 | 第40页 |
| ·HM72 的鉴定与定位 | 第40-41页 |
| ·设计合成dsRNA | 第41页 |
| ·注射dsRNA | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·HM72 的序列分析 | 第41-45页 |
| ·HM72 原核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·HM72 原核表达载体的表达 | 第46页 |
| ·HM72 的组织定位 | 第46-48页 |
| ·设计合成dsRNA | 第48页 |
| ·RNAi 初步分析 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 4 棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3 的分离鉴定与活性分析 | 第51-60页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·试剂及仪器 | 第51页 |
| ·棉铃虫羧酸酯酶HC3 基因的鉴定与测序分析 | 第51页 |
| ·棉铃虫羧酸酯酶HC3 基因重组载体的构建 | 第51-52页 |
| ·pET216-HC3 重组蛋白的表达 | 第52页 |
| ·HC3 重组蛋白羧酸酯酶活性的测定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-59页 |
| ·HC3 的序列分析 | 第52-54页 |
| ·HC3 与其它鳞翅目昆虫羧酸酯酶的序列比较分析 | 第54-56页 |
| ·重组表达载体pET216-HC3 的构建 | 第56-57页 |
| ·重组表达载体pET216-HC3 的表达 | 第57-58页 |
| ·HC3 羧酸酯酶的活性分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 5 棉铃虫ARGONAUTE 蛋白HA8 的分离鉴定与初步分析 | 第60-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·菌株与质粒 | 第60页 |
| ·试剂及仪器 | 第60页 |
| ·棉铃虫围食膜粘蛋白HA8 的克隆与测序分析 | 第60页 |
| ·HA8 原核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·重组子的原核表达与鉴定 | 第61-62页 |
| ·RACE | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-68页 |
| ·HA8 的序列分析 | 第62-65页 |
| ·HA8 原核表达载体的构建 | 第65页 |
| ·HA8 原核表达载体的表达 | 第65-66页 |
| ·棉铃虫中肠总RNA 的提取 | 第66-68页 |
| ·纯化mRNA 与制备RACE-Ready cDNA | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 6 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
