| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 第一节 植物细胞中的钙信号 | 第12-14页 |
| 1 钙信号的产生 | 第12-13页 |
| 2 钙信号的特异性 | 第13-14页 |
| 第二节 植物细胞内的钙响应蛋白 | 第14-16页 |
| 第三节 钙依赖性蛋白激酶 | 第16-22页 |
| 1 CDPKs活性调节机制 | 第18页 |
| 2 CDPKs的亚细胞定位 | 第18-19页 |
| 3 CDPKs的生物化学性质 | 第19-20页 |
| 4 CDPKs的底物 | 第20页 |
| 5 植物CDPKs的生理功能 | 第20-22页 |
| 第四节 番茄CDPKs的研究进展及展望 | 第22-23页 |
| 第五节 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第六节 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 番茄LeCPK2 cDNA及其启动子的克隆及分析 | 第25-51页 |
| 一 材料和方法 | 第25-35页 |
| 1. 植物材料 | 第25页 |
| 2. 质粒及菌种 | 第25页 |
| 3. 试剂 | 第25页 |
| 4. 溶液和培养基配制 | 第25-26页 |
| 5. LeCPK2 cDNA序列的电子克隆 | 第26页 |
| 6. 番茄总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 7. cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| 8. 克隆LeCPK2的cDNA序列 | 第28-29页 |
| 9. PCR产物的胶回收 | 第29页 |
| 10. PCR产物末端加A | 第29页 |
| 11. 加尾产物的回收 | 第29-30页 |
| 12. 目的片段与T载体的连接 | 第30页 |
| 13. 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 14. 重组子的转化 | 第31页 |
| 15. 重组子的鉴定 | 第31-33页 |
| 16. LeCPK2启动子区域的电子克隆 | 第33页 |
| 17. LeCPK2启动子区域电子克隆序列的验证 | 第33-35页 |
| 二 实验结果 | 第35-50页 |
| 1. LeCPK2 cDNA的克隆 | 第35-39页 |
| 2. LeCPK2的生物信息学分析 | 第39-42页 |
| 3. LeCPK2启动子区域的克隆 | 第42-46页 |
| 4. LeCPK2启动子序列的生物信息学分析 | 第46-50页 |
| 三 讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 LeCPK2重组蛋白的活性分析及酶学特性鉴定 | 第51-67页 |
| 一 材料和方法 | 第51-59页 |
| 1 质粒及菌种 | 第51-52页 |
| 2 试剂 | 第52-53页 |
| 3 原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 4 全长和截短LeCPK2的原核表达 | 第54-56页 |
| 5 重组蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| 6 全长和截短LeCPK2激酶活性的分析 | 第58页 |
| 7. LeCPK2酶学特征的鉴定 | 第58-59页 |
| 二 结果 | 第59-63页 |
| 1 原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 2 全长和截短LeCPK2的原核表达和纯化 | 第60-61页 |
| 3 全长和截短LeCPK2的活性检测 | 第61-62页 |
| 4 LeCPK2的酶促动力学测定 | 第62-63页 |
| 三 讨论 | 第63-67页 |
| 1 重组蛋白的表达 | 第64页 |
| 2 激酶活性测定 | 第64-65页 |
| 3 LeCPK2的活性与酶学性质 | 第65-67页 |
| 第四章 LeCPK2基因表达分析 | 第67-75页 |
| 一 材料与方法 | 第67-68页 |
| 1 试剂 | 第67页 |
| 2 材料处理 | 第67页 |
| 3 半定量RT-PCR | 第67-68页 |
| 二 结果 | 第68-72页 |
| 1 扩增平台期的确定 | 第68-69页 |
| 2 LeCPK2的器官特异性表达 | 第69-70页 |
| 3 LeCPK2对盐和干旱处理的响应 | 第70页 |
| 4 温度对番茄LeCPK2表达的影响 | 第70-71页 |
| 5 LeCPK2对伤害和激素的应答反应 | 第71-72页 |
| 三 讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 LeCPK2的转基因分析 | 第75-95页 |
| 一 材料和方法 | 第75-84页 |
| 1. 质粒和菌种 | 第75页 |
| 2. 试剂 | 第75-76页 |
| 3. 培养基 | 第76页 |
| 4. 植物表达载体的构建 | 第76-78页 |
| 5 农杆菌(GV1301)感受态细胞的制备 | 第78页 |
| 6 电转化 | 第78-79页 |
| 7 烟草无菌苗的培养 | 第79页 |
| 8 农杆菌的的准备 | 第79页 |
| 9 侵染及转基因植株的培养 | 第79-80页 |
| 10 转基因植株的荧光检测 | 第80页 |
| 11 转基因植株的PCR检测 | 第80-81页 |
| 12 转基因植株的耐热性分析 | 第81页 |
| 13 生理指标的测定 | 第81-84页 |
| 二 结果 | 第84-92页 |
| 1 植物表达载体pCAMBIA-1304-LeCPK2的酶切鉴定 | 第84页 |
| 2 转基因烟草的获得 | 第84-85页 |
| 3 转基因植株的鉴定 | 第85-87页 |
| 4 LeCPK2转基因植株的耐热性分析 | 第87-90页 |
| 5 转基因植株生理指标的测定 | 第90-92页 |
| 三 讨论 | 第92-95页 |
| 结论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
