| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 目录 | 第16-22页 |
| 第一章 小鼠骨髓内皮细胞条件培养液促进鼠胚胎干细胞向内皮细胞的诱导分化 | 第22-32页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| ·材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·细胞培养试剂 | 第22-23页 |
| ·免疫试剂 | 第23页 |
| ·细胞系 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·内皮细胞条件培养液的制备 | 第23-24页 |
| ·鼠ES细胞的分化 | 第24页 |
| ·流式细胞术分析 | 第24页 |
| ·挑选DiI-Ac-LDL标记的细胞 | 第24-25页 |
| ·免疫表型分析 | 第25页 |
| ·DiI-Ac-LDL阳性细胞的功能分析 | 第25页 |
| ·统计分析 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-26页 |
| ·mEC-CM促进鼠胚胎干细胞分化为Flk1+细胞 | 第25-26页 |
| ·DiI-Ac-LDL阳性细胞能用机械挑选方法从分化的mESCs中分离出来 | 第26页 |
| ·mESC来源的DiI-Ac-LDL阳性细胞的表型和功能分析显示它们是内皮样细胞 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 4 结论 | 第28-29页 |
| 5 附图 | 第29-32页 |
| 第二章 人胚胎干细胞来源的内皮细胞的诱导分化及其与人脐静脉内皮细胞和脐血内皮祖细胞的比较 | 第32-47页 |
| 1 材料与方法 | 第32-37页 |
| ·材料与试剂 | 第32-33页 |
| ·细胞培养试剂 | 第32-33页 |
| ·免疫试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·人胚胎成纤维细胞(hEFs)的培养 | 第34页 |
| ·人胚胎干细胞(hESCs)的培养 | 第34页 |
| ·hESCs在体外自发分化 | 第34页 |
| ·磁珠分选KDR+细胞 | 第34页 |
| ·人脐血内皮祖细胞(CBEPCs)的培养 | 第34-35页 |
| ·人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的培养 | 第35页 |
| ·免疫表型分析 | 第35-36页 |
| ·内皮细胞功能检测 | 第36页 |
| ·流式细胞术 | 第36页 |
| ·MTT增殖实验 | 第36页 |
| ·荧光原位杂交(FISH)检测 | 第36-37页 |
| ·统计分析 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-38页 |
| ·经鉴定hES细胞株为正常未分化的人胚胎干细胞 | 第37页 |
| ·在hEB分化过程中,内皮标志的表达上调 | 第37页 |
| ·EC-KDR+,CBEPCs和HUVECs都表达内皮细胞的特性 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 4 结论 | 第40-41页 |
| 5 附图 | 第41-47页 |
| 第三章 IPS细胞向内皮细胞和平滑肌细胞的诱导分化 | 第47-63页 |
| 1 材料方法 | 第47-53页 |
| ·材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·细胞株 | 第47-48页 |
| ·分子生物学试剂 | 第48页 |
| ·细胞生物学试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·细胞培养 | 第49-50页 |
| ·流式分选或分析 | 第50-51页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第51页 |
| ·定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR) | 第51-52页 |
| ·内皮细胞功能的鉴定 | 第52页 |
| ·平滑肌细胞功能鉴定 | 第52页 |
| ·统计分析 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-54页 |
| ·O9iPS细胞及mES细胞能向内皮细胞和平滑肌细胞诱导分化,分化效率相似 | 第53页 |
| ·iPS细胞向内皮细胞及平滑肌细胞分化后的免疫表型及功能检测 | 第53-54页 |
| ·内皮细胞特异性基因的表达 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 5 附图 | 第57-63页 |
| 第四章 平滑肌细胞重要调节因子MYOCARDIN的协同转录因子的筛选 | 第63-87页 |
| 1 材料和方法 | 第63-72页 |
| ·试验材料 | 第63-66页 |
| ·细胞株 | 第63页 |
| ·细胞培养 | 第63页 |
| ·分子生物学试剂 | 第63-64页 |
| ·质粒 | 第64页 |
| ·蛋白检测试剂 | 第64-65页 |
| ·抗体 | 第65-66页 |
| ·主要仪器及耗材:见第三章 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-72页 |
| ·细胞培养 | 第66-67页 |
| ·萤光素酶活性测定 | 第67页 |
| ·构建带Myc Tag的质粒 | 第67-70页 |
| ·Western检测蛋白表达 | 第70-71页 |
| ·Co-IP | 第71-72页 |
| ·Real-Time PCR | 第72页 |
| 2 结果 | 第72-74页 |
| ·luciferase实验筛选 | 第72页 |
| ·选择策略 | 第72-73页 |
| ·RAI14及MAGED1在平滑肌细胞分化中初步功能研究 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 5 附图 | 第77-87页 |
| 第五章 锌指蛋白297B协同MYOCARDIN调节平滑肌细胞的分化 | 第87-98页 |
| 1 材料方法 | 第87-92页 |
| ·细胞,动物与试剂 | 第87-88页 |
| ·仪器与设备 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-92页 |
| ·球囊损伤大鼠动物模型 | 第88页 |
| ·细胞培养 | 第88-89页 |
| ·细胞转染 | 第89页 |
| ·RNA提取及定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR) | 第89-90页 |
| ·构建ZNF297B-Myc/His的质粒 | 第90页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第90页 |
| ·萤光素酶活性测定 | 第90页 |
| ·Western | 第90-91页 |
| ·免疫共沉淀(co-IP) | 第91页 |
| ·统计学分析 | 第91-92页 |
| 2 结果 | 第92-93页 |
| ·ZNF297B在血管平滑肌中高表达 | 第92页 |
| ·ZNF297B在平滑肌分化过程中表达上调,在平滑肌增殖过程中表达下调 | 第92页 |
| ·ZNF297B在细胞中的表达主要分布与核内及核周的细胞质 | 第92页 |
| ·Myocardin能与ZNF297B蛋白结合,并影响其表达 | 第92-93页 |
| 3 讨论 | 第93-94页 |
| 4 结论 | 第94页 |
| 5 附图 | 第94-98页 |
| 课题创新性 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-122页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
