| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-43页 |
| ·引言 | 第16-18页 |
| ·定向进化 | 第18-35页 |
| ·定向进化简介 | 第18-21页 |
| ·半理性定向进化 | 第21-35页 |
| ·靛玉红的生物制备 | 第35-39页 |
| ·靛玉红生物制备的意义 | 第35-36页 |
| ·目前靛玉红生物制备尚存在的问题 | 第36-39页 |
| ·P450 BM-3的定向进化研究 | 第39-40页 |
| ·课题的研究目的和内容 | 第40-43页 |
| ·研究目标和内容 | 第40-41页 |
| ·研究方法、技术路线和实验方案 | 第41-43页 |
| 第二章 P450 BM-3饱和突变文库的构建及筛选 | 第43-60页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·材料与仪器 | 第44-46页 |
| ·宿主菌和质粒 | 第44-45页 |
| ·酶及分子生物学试剂 | 第45页 |
| ·化学试剂 | 第45页 |
| ·培养基配方 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·饱和突变文库构建 | 第47-48页 |
| ·饱和突变文库筛选 | 第48页 |
| ·突变酶序列测定 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-58页 |
| ·定点饱和突变文库构建 | 第49-52页 |
| ·定点饱和突变文库筛选 | 第52-58页 |
| ·DNA测序 | 第58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 第三章 D168W突变酶的酶学性质研究 | 第60-71页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·试剂与材料 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-70页 |
| ·突变酶P450 BM-3的分离纯化 | 第63-66页 |
| ·突变酶催化活力及动力学特征分析 | 第66-68页 |
| ·突变酶电子耦合率分析 | 第68页 |
| ·突变酶催化产物组成测定 | 第68页 |
| ·pH对突变酶羟基化反应的影响 | 第68-69页 |
| ·突变酶热稳定性测定 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 突变酶催化吲哚羟基化产生靛玉红的机理分析 | 第71-84页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·试剂与器材 | 第71-72页 |
| ·质粒与菌株 | 第71页 |
| ·分子生物学及化学试剂 | 第71-72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·实验仪器 | 第72页 |
| ·蛋白质模拟和分子对接软件 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-74页 |
| ·P450 BM-3突变酶的表达和制备 | 第72页 |
| ·吲哚羟基化反应过程监测 | 第72页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)分析 | 第72-73页 |
| ·突变酶三维建模及其与吲哚对接分析 | 第73-74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-82页 |
| ·D168W突变酶制备 | 第74页 |
| ·HPLC检测条件的确定 | 第74-75页 |
| ·突变酶D168W催化吲哚羟基化的机理分析 | 第75-77页 |
| ·酶与吲哚作用关系分析 | 第77-82页 |
| ·小结 | 第82-84页 |
| 第五章 结论与展望 | 第84-87页 |
| ·结论 | 第84-85页 |
| ·展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-102页 |
| 作者简历 | 第102-103页 |
| 在学期间的科研成果 | 第103页 |