| Acknowledgement | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| Abbreviation | 第11-13页 |
| 1 Introduction | 第13-15页 |
| 2 Literature Review | 第15-28页 |
| 2.1 History and epidemiology | 第15-16页 |
| 2.2 Clinical manifestations and diagnosis | 第16-17页 |
| 2.3 Causes of Pathogenesis | 第17-20页 |
| 2.3.1 Genes are involved in BD Pathology | 第17-20页 |
| 2.3.2 Role of Infectious agents and BD pathogenesis | 第20页 |
| 2.4 Research progress in screening of BD autoantigens | 第20-25页 |
| 2.4.1 Role of modern Techniques in screening of BDautoantigens | 第21-25页 |
| 2.5 Research Contents and Approaches | 第25-28页 |
| 3 Material and methods | 第28-53页 |
| 3.1 HUVE Cell Line and screening of BD autoantigens | 第29-30页 |
| 3.1.1 Sub Cell Culture | 第29-30页 |
| 3.2 Main Reagents and instruments | 第30-33页 |
| 3.3 Preparation of main working solutions/reagents | 第33-36页 |
| 3.4 Experimental methods | 第36-45页 |
| 3.4.1 Isolation of primary endothelial cells from umbilical cord vein | 第36页 |
| 3.4.2 Passage of primary endothelial cells | 第36-37页 |
| 3.4.3 Primary cryopreservation of endothelial cells | 第37页 |
| 3.4.4 Cells recovery | 第37-38页 |
| 3.4.5 RNA Extraction | 第38页 |
| 3.4.6 RT PCR | 第38-39页 |
| 3.4.7 Primer Designing | 第39页 |
| 3.4.8 Target gene PCR amplification (50μL reaction system) | 第39-40页 |
| 3.4.9 Plasmid construction and amplification | 第40-41页 |
| 3.4.10 Enzyme double digestion | 第41页 |
| 3.4.11 Ligation of target gene with pET 28 a (+) plasmid | 第41页 |
| 3.4.12 DNA Transformation | 第41-42页 |
| 3.4.13 Verification of transformed product | 第42-43页 |
| 3.4.14 Construction of expression strains | 第43页 |
| 3.4.15 IPTG induced expression | 第43页 |
| 3.4.16 Purification of the target protein | 第43-44页 |
| 3.4.17 Dialysis and Concentration of Purified Proteins | 第44-45页 |
| 3.4.18 CA method for protein concentration determination | 第45页 |
| 3.5 Validation of purified protein | 第45-48页 |
| 3.5.1 SDS-PAGE and Western blotting | 第45-48页 |
| 3.6 Mass spectrometry | 第48-49页 |
| 3.7 Procedure for Enzyme Linked Immunosorbant assay (ELISA) | 第49-50页 |
| 3.7.1 ELISA data analysis | 第49-50页 |
| 3.8 Immunoprecipitation | 第50-51页 |
| 3.9 Indirect immunofluorescence assay | 第51页 |
| 3.10 Immunohistochemistry | 第51-52页 |
| 3.11 Statistical analysis | 第52-53页 |
| 4 Screening of autoantibodies (Annexin A1 and A2) in Behcet's Disease patientsby using bioinformatics tools | 第53-63页 |
| 4.1 Cell culture | 第55页 |
| 4.2 Sequence alignment and antigenic epitope prediction by usingbioinformatics tools | 第55-57页 |
| 4.3 Cloning, expression and purification of AnnexinA1 | 第57-58页 |
| 4.4 Identification of Annexin A1 as autoantigen | 第58-59页 |
| 4.5 In house development of ELISA | 第59-63页 |
| 5 Identification of hnRNP C1/C2 as an autoantigen in patients with Behcet'sDisease | 第63-73页 |
| 5.1 Structure, properties and biological functions of hnRNPs | 第63页 |
| 5.2 Nuclear heterogeneous ribonucleoprotein and disease | 第63-64页 |
| 5.3 Research progress on Behcet,s disease autoantigen | 第64-65页 |
| 5.4 Expression and purification of hnRNP C1 C2 protein | 第65-68页 |
| 5.5 Western Blotting | 第68-70页 |
| 5.6 ELISA results | 第70-71页 |
| 5.7 Statistical analysis | 第71页 |
| 5.8 Discussion | 第71-73页 |
| 6 Moesin expressions correlates its involvement in patients with Behcet's Disease | 第73-82页 |
| 6.1 Subjects | 第74页 |
| 6.2 Moesin cloning, expression and purification | 第74-75页 |
| 6.3 Western Blotting | 第75-77页 |
| 6.4 Verification of cross reactivity of ERM antibodies | 第77-78页 |
| 6.5 Immunoprecipitation | 第78页 |
| 6.6 ELISA | 第78-79页 |
| 6.7 Clinical significance of BD patients | 第79页 |
| 6.8 Resazurin assay experiments | 第79-80页 |
| 6.9 Discussion | 第80-82页 |
| 7 Circulation autoantibodies against C-terminus of NuMA in patients withBehcet's disease | 第82-90页 |
| 7.1 Collection of samples | 第82页 |
| 7.2 Indirect immunofluorescence assay | 第82-84页 |
| 7.3 Plasmid Construction, expression and purification of NuMA C-terminalpeptide | 第84-85页 |
| 7.4 The prevalence of antibody against C-NuMA | 第85-86页 |
| 7.5 The clinical characteristics in BD patients | 第86-88页 |
| 7.6 Discussion | 第88-90页 |
| 8 Application of high throughput techniques in screening of Behcet's Disease autoantigens | 第90-109页 |
| 8.1 Cell Chip Technology | 第90-92页 |
| 8.1.1 Experimental results | 第90-92页 |
| 8.2 Application of phage display technology in screening of BD autoantigens | 第92-94页 |
| 8.2.1 Experimental Results and Discussion | 第93-94页 |
| 8.3 Application of Mass spectrometry in screening of BD autoantigens | 第94-97页 |
| 8.3.1 Identification of antigenic proteins | 第97页 |
| 8.4 Experimental Materials | 第97-99页 |
| 8.4.1 Establishment of experimental methods | 第99页 |
| 8.5 Selection of serum for experimental use | 第99-104页 |
| 8.5.1 Experimental steps | 第100-101页 |
| 8.5.2 Results of experimental methods | 第101-104页 |
| 8.6 Selection of experimental serum | 第104-105页 |
| 8.7 Autoantigens detection with autoantibodies (Immunoassays) | 第105-106页 |
| 8.8 Verification of autoantigens | 第106-107页 |
| 8.9 Summary | 第107-109页 |
| 9 Conclusion | 第109-111页 |
| References | 第111-129页 |
| 作者简历及在学研究成果 | 第129-132页 |
| 学位论文数据集 | 第132页 |
