| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 先天性免疫系统 | 第14-15页 |
| 1.1.1 机体免疫系统概述 | 第14页 |
| 1.1.2 先天性免疫系统的激活方式 | 第14-15页 |
| 1.2 模式识别受体概述 | 第15-18页 |
| 1.3 胞质DNA受体 | 第18-23页 |
| 1.3.1 胞质DNA受体及STING信号通路的激活 | 第18-21页 |
| 1.3.2 DAI对胞质dsDNA的识别 | 第21页 |
| 1.3.3 IFI16对胞质dsDNA的识别 | 第21页 |
| 1.3.4 DDX41对胞质dsDNA的识别 | 第21-22页 |
| 1.3.5 DNA-PK及MRE11对胞质dsDNA的识别 | 第22页 |
| 1.3.6 cGAS对胞质dsDNA的识别 | 第22-23页 |
| 1.4 干扰素概述 | 第23-25页 |
| 1.4.1 干扰素的激活 | 第23-24页 |
| 1.4.2 干扰素诱导基因的激活 | 第24-25页 |
| 1.5 受体相互作用蛋白3 | 第25-27页 |
| 1.6 受体相互作用蛋白1 | 第27页 |
| 1.7 立题背景 | 第27-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-61页 |
| 2.1 实验相关药品试剂和细胞株 | 第28-30页 |
| 2.1.1 细胞实验相关药品 | 第28页 |
| 2.1.2 细胞培养实验相关试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 分子生物学相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 蛋白分析相关试剂 | 第29页 |
| 2.1.5 RNA制备及相关检测试剂 | 第29页 |
| 2.1.6 实验所涉及的细胞株 | 第29-30页 |
| 2.2 常用主要仪器 | 第30页 |
| 2.3 DNA相关实验和方法 | 第30-49页 |
| 2.3.1 质粒载体 | 第30-35页 |
| 2.3.1.1 慢病毒载体 | 第30-31页 |
| 2.3.1.2 pBOB普通基因表达载体 | 第31页 |
| 2.3.1.3 RNA干扰载体 | 第31-32页 |
| 2.3.1.4 pLuc-MCS报告基因载体 | 第32-33页 |
| 2.3.1.5 gRNA基因敲除载体 | 第33-35页 |
| 2.3.2 聚合酶链式扩增反应相关实验 | 第35-37页 |
| 2.3.2.1 普通基因的片段扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.2.2 升温梯度PCR实验 | 第36页 |
| 2.3.2.3 基因突变及突变引物设计 | 第36-37页 |
| 2.3.3 DNA的限制性内切酶消化 | 第37页 |
| 2.3.4 DNA的回收和纯化 | 第37-39页 |
| 2.3.4.1 DNA电泳 | 第37-38页 |
| 2.3.4.2 回收纯化DNA片段 | 第38-39页 |
| 2.3.5 连接酶非依赖克隆相关实验 | 第39-41页 |
| 2.3.5.1 LIC的背景及原理 | 第39-40页 |
| 2.3.5.2 LIC实验方法 | 第40-41页 |
| 2.3.6 T4 DNA连接酶连接相关实验 | 第41-42页 |
| 2.3.6.1 shRNA与gRNA的引物设计及Oligo合成 | 第41-42页 |
| 2.3.6.2 T4 DNA连接反应 | 第42页 |
| 2.3.7 感受态制备及转化 | 第42-44页 |
| 2.3.7.1 感受态制备 | 第42-43页 |
| 2.3.7.2 DNA的转化 | 第43-44页 |
| 2.3.8 质粒DNA的提取 | 第44-46页 |
| 2.3.8.1 中量提取DNA | 第44-45页 |
| 2.3.8.2 大量提取DNA | 第45-46页 |
| 2.3.9 质粒载体的构建 | 第46-49页 |
| 2.3.9.1 相关基因编号及引物设计 | 第46-47页 |
| 2.3.9.2 相关基因突变及引物设计 | 第47-48页 |
| 2.3.9.3 相关shRNA的设计及序列信息 | 第48页 |
| 2.3.9.4 相关gRNA的设计及序列信息 | 第48-49页 |
| 2.4 RNA相关实验和方法 | 第49-52页 |
| 2.4.1 qPCR分析特定基因的表达 | 第49-52页 |
| 2.4.1.1 细胞总RNA提取 | 第49-50页 |
| 2.4.1.2 逆转录合成cDNA | 第50-51页 |
| 2.4.1.3 实时荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.5 细胞相关实验和方法 | 第52-57页 |
| 2.5.1 细胞培养 | 第52-53页 |
| 2.5.1.1 细胞培养基及相关溶液配制 | 第52-53页 |
| 2.5.1.2 细胞的培养和传代 | 第53页 |
| 2.5.2 细胞转染 | 第53-54页 |
| 2.5.2.1 磷酸钙转染法 | 第53页 |
| 2.5.2.2 脂质体2000转染ISD | 第53-54页 |
| 2.5.2.3 电转染法 | 第54页 |
| 2.5.4 慢病毒包装与感染 | 第54-57页 |
| 2.5.4.1 慢病毒的包装 | 第54-55页 |
| 2.5.4.2 慢病毒感染目的细胞 | 第55页 |
| 2.5.4.3 稳定表达细胞集群的筛选及单克隆的获得 | 第55-56页 |
| 2.5.4.4 敲除效率评估及单克隆的基因鉴定 | 第56-57页 |
| 2.6 蛋白质相关实验和方法 | 第57-61页 |
| 2.6.1 免疫共沉淀 | 第57-58页 |
| 2.6.2 免疫印迹 | 第58-59页 |
| 2.6.4 荧光素酶检测实验 | 第59-61页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第61-75页 |
| 3.1 RIP3能够促进STING所介导的IFN-β的产生 | 第61-62页 |
| 3.1.1 RIP3过表达影响STING信号通路而非MAVS信号通路 | 第61-62页 |
| 3.2 RIP3能够影响dsDNA诱导的IFN-β的产生 | 第62-67页 |
| 3.2.1 RIP3在HeLa细胞中过表达促进ISD诱导的IFN-β产生 | 第62-63页 |
| 3.2.2 HT-29细胞中RIP3敲低抑制了ISD诱导的IFN-β产生 | 第63-65页 |
| 3.2.3 HT-29细胞中RIP3敲除抑制了ISD诱导的IFN-β产生 | 第65-67页 |
| 3.3 RIP3可能通过RIP1促进IFN-β的产生 | 第67-73页 |
| 3.3.1 RIP3激活IFN-β启动子依赖于其RHIM结构域 | 第67-68页 |
| 3.3.2 RIP3 RHIM~(mut)影响TBK1及IRF3的磷酸化修饰 | 第68-69页 |
| 3.3.3 RIP3、RIP3 RHIM~(mut)与STING、TBK1的相互作用 | 第69-70页 |
| 3.3.4 cGAS对ISD所诱导的IFN-β的产生具有关键作用 | 第70-71页 |
| 3.3.5 RIP1能够促进STING介导的IFN-β的激活 | 第71-73页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第73-75页 |
| 附录1 图表索引 | 第75-77页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第77-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
