| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 本论文的创新之处 | 第8-12页 |
| 引言 | 第12-20页 |
| 1. 多分DNA病毒研究概况 | 第12-14页 |
| 1.1 多分DNA病毒粒子 | 第12-13页 |
| 1.2 多分DNA病毒与NF-κB信号通路的关系 | 第13-14页 |
| 2. NF-κB信号通路的研究现状 | 第14-17页 |
| 2.1 NF-κB蛋白的种类 | 第14页 |
| 2.2 IκB蛋白的种类 | 第14-15页 |
| 2.3 NF-κB信号通路 | 第15-16页 |
| 2.4 NF-KB信号通路参与昆虫的免疫反应 | 第16-17页 |
| 3. 昆虫细胞IκB蛋白Cactus的研究现状 | 第17页 |
| 4. NF-κB相互作用蛋白Dip3 | 第17-18页 |
| 5. 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 材料与方法 | 第20-48页 |
| 1. 材料 | 第20-25页 |
| 1.1 斜纹夜蛾Spodoptera litura | 第20页 |
| 1.2 双斑侧沟茧蜂Microplitis bicoloratus | 第20页 |
| 1.3 双斑侧沟茧蜂病毒Microplitis bicoloratus bracovirus (MbBV) | 第20页 |
| 1.4 昆虫细胞 | 第20页 |
| 1.5 质粒载体和感受态细胞 | 第20页 |
| 1.6 实验所用酶类 | 第20-21页 |
| 1.7 试剂盒及相关抗体 | 第21页 |
| 1.8 PCR及蛋白检测相关试剂 | 第21-22页 |
| 1.9 LB培养基 | 第22页 |
| 1.10 实验所用缓冲液 | 第22-24页 |
| 1.11 其他主要相关的试剂 | 第24页 |
| 1.12 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2. 方法 | 第25-41页 |
| 2.1 MbBV病毒的提取 | 第25页 |
| 2.2 病毒粒子的纯化及感染 | 第25-26页 |
| 2.3 感染寄主细胞中病毒DNA片段的检测及mRNA的转录检测 | 第26页 |
| 2.4 细胞转染和LPS免疫刺激 | 第26-27页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第27-30页 |
| 2.6 目的基因的克隆 | 第30-34页 |
| 2.7 质粒提取 | 第34页 |
| 2.8 带酶切位点的T载体构建策略 | 第34-35页 |
| 2.9 真核表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.10 免疫印迹Western blot | 第38-41页 |
| 2.11 免疫荧光 | 第41页 |
| 3. dsRNA feeding的质粒构建 | 第41-45页 |
| 4. RNAi feeding | 第45-48页 |
| 结果 | 第48-75页 |
| 1. MbBV调控NF-κB信号通路 | 第48-54页 |
| 1.1 MbBV感染诱导昆虫细胞形成凋亡小体 | 第48-50页 |
| 1.2 MbBV感染的昆虫细胞内,病毒DNA片段的检测 | 第50页 |
| 1.3 MbBV感染后,昆虫细胞内病毒基因的转录检测 | 第50-51页 |
| 1.4 MbBV病毒调控凋亡细胞的NF-κB信号通路抑制抗菌肽基因attacin的转录 | 第51-52页 |
| 1.5 表达单个病毒蛋白不能抑制LPS刺激下的NF-κB信号通路 | 第52-54页 |
| 2. 茧蜂病毒IκB-like蛋白和Dorsal-interacting protein 3(Dip3)形成异源二聚体 | 第54-67页 |
| 2.1 茧蜂病毒IκB -like蛋白和Dip3蛋白的结构分析 | 第54-55页 |
| 2.2 Dip3蛋白在不同细胞中的蛋白表达 | 第55-56页 |
| 2.3 Dip3蛋白的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 2.4 Dip3蛋白和病毒IκB-like蛋白形成异源二聚体 | 第57-59页 |
| 2.5 Cactus蛋白在不同细胞中的蛋白表达 | 第59-60页 |
| 2.6 Cactus蛋白的亚细胞定位 | 第60页 |
| 2.7 Cactus蛋白和Dip3蛋白未形成异源二聚体 | 第60-61页 |
| 2.8 病毒IκB-like蛋白和Cactus蛋白的修饰化位点预测 | 第61-64页 |
| 2.9 MbBV病毒抑制NF-κB相互作用蛋白Cactus和Dip3的表达 | 第64-66页 |
| 2.10 MbBV病毒感染后过表达Dip3蛋白能影响NF-κB下游基因Innexins的转录 | 第66-67页 |
| 3. 在寄生蜂幼虫活体条件下,RNAi Cactus、RNAi Dip3诱导寄主细胞凋亡但不影响寄主发育 | 第67-75页 |
| 3.1 RNAi Cactus和RNAi Dip3的沉默检测 | 第67-69页 |
| 3.2 寄生蜂幼虫活体条件下,RNA i Cactus诱导斜纹夜蛾的血淋巴细胞凋亡 | 第69-71页 |
| 3.3 寄生蜂幼虫活体条件下,RNAi Dip3诱导斜纹夜蛾血淋巴细胞凋亡 | 第71-73页 |
| 3.4 单个RNAi Cactus基因后未抑制斜纹夜蛾的头壳发育 | 第73-74页 |
| 3.5 单个RNAi Dip3基因后未抑制斜纹夜蛾的头壳发育 | 第74-75页 |
| 讨论 | 第75-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 1. MbBV病毒抑制NF-κB信号通路 | 第78页 |
| 2. 病毒IκB-like蛋白会和Dip3蛋白形成异源二聚体 | 第78页 |
| 3. 在寄生蜂幼虫活体条件下RNAi Cactus、RNAi Dip3蛋白会诱导寄主细胞凋亡 | 第78-79页 |
| 对下一步工作的建议 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-102页 |
| 附录1 Cactus和Dip3的克隆 | 第80-84页 |
| 附录2 dsRNA feeding载体构建 | 第84-87页 |
| 附录3 Relish基因的克隆 | 第87-90页 |
| 附录4 Vank101稳定表达细胞系的构建 | 第90-91页 |
| 附录5 相关序列与蛋白翻译 | 第91-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 在读期间发表文章及获奖情况 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
