摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7页 |
前言 | 第9-15页 |
PGC-1α参与心脏代谢与线粒体的新生 | 第9-10页 |
Mitofusions在心脏参与线粒体的融合和质量监控过程 | 第10-11页 |
KLFs家族与心脏功能有关 | 第11-15页 |
材料与方法 | 第15-47页 |
1. 实验材料 | 第15-23页 |
1.1. 实验动物 | 第15页 |
1.2. 菌株和细胞系 | 第15页 |
1.3. 质粒载体 | 第15-19页 |
1.4. 工具酶及分子量标准 | 第19页 |
1.5. 试剂盒 | 第19-20页 |
1.6. 主要化学试剂(按试剂公司分类) | 第20-21页 |
1.7. 主要仪器及设备 | 第21页 |
1.8. 分析软件 | 第21页 |
1.9. 引物序列 | 第21-23页 |
2. 实验方法 | 第23-47页 |
2.1. 质粒载体的构建 | 第23-28页 |
2.2. 细胞培养 | 第28-29页 |
2.3. 细胞瞬时转染 | 第29页 |
2.4. 双荧光素酶报告实验测定启动子活性 | 第29-30页 |
2.5. 总RNA提取及cDNA合成 | 第30-31页 |
2.6. Real-Time PCR实验 | 第31-32页 |
2.7. Western blot | 第32-34页 |
2.8. 重组腺病毒的构建与包装 | 第34-37页 |
2.9. 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒 | 第37-38页 |
2.10. 腺病毒纯化后滴度的测定 | 第38-40页 |
2.11. 小鼠心脏原代细胞的分离以及培养 | 第40-41页 |
2.12. MEFs细胞的分离 | 第41-43页 |
2.13. 分离心肌线粒体 | 第43-44页 |
2.14. 流式细胞仪分析线粒体 | 第44页 |
2.15. 线粒体呼吸实验 | 第44-45页 |
2.16. 共聚焦显微镜 | 第45页 |
2.17. 腺病毒感染以及环保霉素A(Cyclosporin A)处理 | 第45页 |
2.18. 小鼠生化、生理指标的测定 | 第45-46页 |
2.19. 统计分析 | 第46-47页 |
结果 | 第47-78页 |
第一部分:KLF9通过调节线粒体新生以及功能异常线粒体的清除过程来影响成熟小鼠心脏中线粒体的功能 | 第47-68页 |
一、KLF9对于心脏功能十分重要。 | 第47-48页 |
二、在小鼠体内敲除或者过表达KLF9均能引起心脏功能影响明显,但心肌肥厚的类型不同 | 第48-52页 |
三、KLF9影响线粒体的形态和数量。 | 第52-56页 |
四、在心脏中过表达KLF9会导致心肌细胞坏死,引起心肌纤维化 | 第56-59页 |
五、KLF9可以直接调控PGC-1α和Mfn2的表达 | 第59-64页 |
六、KLF9缺失加速了血管紧张素Ⅱ诱导的心衰过程 | 第64-66页 |
七、KLF9敲除影响了 PINKl-Parkin介导的线粒体清除过程,导致血管紧张素Ⅱ诱导时心脏中出现大量异常的线粒体 | 第66-68页 |
第二部分:KLF9通过开启MPTP导致心肌坏死 | 第68-75页 |
第三部分:KLF9对出生后心脏线粒体代谢成熟过程起调节作用 | 第75-78页 |
讨论 | 第78-83页 |
小结 | 第83-84页 |
参考文献 | 第84-89页 |
综述 | 第89-104页 |
参考文献 | 第98-104页 |
附录 英汉名词对照 | 第104-107页 |
致谢 | 第107-108页 |