| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 第一部分 前言 | 第14-20页 |
| 1.类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞参与病变进展 | 第14-17页 |
| 1.1 类风湿性关节炎是一种自身免疫性疾病 | 第14页 |
| 1.2 关节腔内的多种细胞参与病变进展 | 第14-15页 |
| 1.3 RAFLS在RA中发挥重要作用 | 第15-17页 |
| 1.4 RA与信号通路 | 第17页 |
| 2.ISG20基因 | 第17-18页 |
| 3.ISG20与RA的关系及本研究拟解决的科学问题 | 第18-20页 |
| 第二部分 ISG20在RAFLS中的生物学功能 | 第20-38页 |
| 1.材料 | 第20-21页 |
| 1.1 组织标本来源 | 第20页 |
| 1.2 实验主要试剂及耗材 | 第20-21页 |
| 1.3 实验主要仪器 | 第21页 |
| 2.实验方法 | 第21-28页 |
| 2.1 细胞的获取和培养 | 第21页 |
| 2.2 siRNA的瞬时转染 | 第21-22页 |
| 2.3重组腺病毒过表达ISG20 | 第22页 |
| 2.4 MTS法检测ISG20对细胞增殖能力的影响 | 第22页 |
| 2.5 体外管腔形成实验 | 第22页 |
| 2.6 流式细胞仪检测细胞周期 | 第22-23页 |
| 2.7 划痕法检测细胞迁移能力 | 第23-24页 |
| 2.8 Transwell法检测RAFLS侵袭能力 | 第24页 |
| 2.9 外周血单核细胞的获取 | 第24-25页 |
| 2.10 ISG20对与Th17细胞分化相关因子的影响 | 第25-26页 |
| 2.11 Trizol法提取总RNA | 第26页 |
| 2.12 实时定量RT-qPCR | 第26-27页 |
| 2.13 Westernblot方法检测蛋白水平的表达 | 第27页 |
| 2.14 数据处理 | 第27-28页 |
| 3.实验结果 | 第28-35页 |
| 3.1 沉默及过表达ISG20的效率验证 | 第28-29页 |
| 3.2 ISG20对RAFLS增殖的调控 | 第29页 |
| 3.3 ISG20介导RAFLS对CRL-1730管腔形成的调控 | 第29-31页 |
| 3.4 ISG20对细胞周期的调控 | 第31页 |
| 3.5 ISG20对RAFLS中炎性因子IL-6的表达调控 | 第31-32页 |
| 3.6 ISG20对Th17细胞分化相关因子的调控 | 第32-34页 |
| 3.7 ISG20对RAFLS中破骨相关因子的表达调控 | 第34-35页 |
| 3.8 ISG20对细胞迁移和细胞侵袭没有影响 | 第35页 |
| 4.讨论 | 第35-37页 |
| 5.小结 | 第37-38页 |
| 第三部分 ISG20在RAFLS中异常表达的调控机制 | 第38-44页 |
| 1.实验样本和试剂 | 第38页 |
| 2.实验仪器 | 第38页 |
| 3.实验方法 | 第38-39页 |
| 3.1 细胞的处理 | 第38页 |
| 3.2 CLI095对LPS诱导ISG20产生的影响 | 第38-39页 |
| 3.3 数据处理 | 第39页 |
| 4.实验结果 | 第39-41页 |
| 4.1 促炎因子IL-6、LPS和TNF-α对ISG20表达的影响 | 第39-40页 |
| 4.2 LPS诱导ISG20表达的信号通路 | 第40-41页 |
| 5.讨论 | 第41-42页 |
| 6.小结 | 第42-44页 |
| 第四部分 ISG20调控RAFLS生物学活性的分子机制 | 第44-58页 |
| 1.实验材料 | 第44页 |
| 2.实验仪器 | 第44页 |
| 3.实验方法 | 第44-47页 |
| 3.1 ISG20调控的mRNA和miRNA预测 | 第44页 |
| 3.2 MicroRNA表达水平的检测 | 第44-46页 |
| 3.3 数据库预测以IL-6为靶基因的miRNA | 第46页 |
| 3.4 miRNA的表达调控 | 第46页 |
| 3.5 沉默ISG20对转录组的调控 | 第46页 |
| 3.6 放线菌素D检测ISG20对靶基因mRNA降解速率的影响 | 第46-47页 |
| 3.7 数据分析 | 第47页 |
| 4.实验结果 | 第47-54页 |
| 4.1 转录组测序结果分析 | 第47-52页 |
| 4.2 ISG20对miRNA的表达调控 | 第52-54页 |
| 5.讨论 | 第54-56页 |
| 6.小结 | 第56-58页 |
| 第五部分 结论 | 第58-60页 |
| 1.ISG20在RAFLS中的生物学功能 | 第58页 |
| 2.ISG20在RAFLS中异常表达的调控机制 | 第58-59页 |
| 3.ISG20调控RAFLS生物学活性的分子机制 | 第59-60页 |
| 创新与不足 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附表 | 第68-69页 |
| 附图 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
