摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
1 绪论 | 第8-18页 |
1.1 植物细胞壁 | 第8-9页 |
1.2 纤维素 | 第9-10页 |
1.3 纤维素合成相关基因 | 第10-13页 |
1.3.1 CESA基因 | 第10-11页 |
1.3.2 CSL基因 | 第11-12页 |
1.3.3 KORRIGAN基因 | 第12页 |
1.3.4 KOBITO基因 | 第12页 |
1.3.5 CTL基因 | 第12页 |
1.3.6 Knopf基因 | 第12-13页 |
1.3.7 COBRA基因 | 第13页 |
1.4 COBRA基因研究现状 | 第13-15页 |
1.5 本研究涉及的相关技术 | 第15-16页 |
1.5.1 Cas9/gRNA技术 | 第15页 |
1.5.2 植物组织培养 | 第15-16页 |
1.5.3 农杆菌介导法遗传转化 | 第16页 |
1.6 本研究目的和意义 | 第16-18页 |
2 材料与方法 | 第18-30页 |
2.1 植物材料 | 第18页 |
2.2 菌株与载体 | 第18页 |
2.3 实验仪器 | 第18页 |
2.4 主要试剂、培养基及溶液 | 第18-19页 |
2.5 实验方法 | 第19-30页 |
2.5.1 基因数据收集及序列分析 | 第19页 |
2.5.2 植物基因组DNA提取 | 第19页 |
2.5.3 植物总RNA的提取 | 第19-20页 |
2.5.4 首链cDNA合成 | 第20-21页 |
2.5.5 引物设计 | 第21-22页 |
2.5.6 载体构建 | 第22-24页 |
2.5.7 目的DNA片段胶回收 | 第24-25页 |
2.5.8 大肠杆菌转化 | 第25页 |
2.5.9 质粒提取 | 第25页 |
2.5.10 农杆菌感受态的转化 | 第25-26页 |
2.5.11 半定量RT-PCR | 第26页 |
2.5.12 毛果杨遗传转化 | 第26-27页 |
2.5.13 转基因植株鉴定及靶基因位点编辑鉴定 | 第27页 |
2.5.14 植物组织石蜡包埋与切片 | 第27-28页 |
2.5.15 细胞壁组织化学染色 | 第28页 |
2.5.16 光学显微镜观察 | 第28-29页 |
2.5.17 扫描电镜 | 第29页 |
2.5.18 细胞壁厚度测量 | 第29-30页 |
3 结果与分析 | 第30-44页 |
3.1 毛果杨COBRA基因家族分析 | 第30-32页 |
3.2 毛果杨COBRA家族基因组织转录表达特性 | 第32-33页 |
3.3 PtrCOBRA3和PtrCOBRA11基因编辑载体构建 | 第33-34页 |
3.4 pHSE401-PtrCOBRA(gRNA)遗传转化及转基因植株鉴定 | 第34-36页 |
3.5 转基因植株PtrCOBRA3和PtrCOBRA11基因编辑分析 | 第36-37页 |
3.6 ptrcobra3和ptrcobra11突变体株高等表型分析 | 第37-40页 |
3.7 PtrCOBRA3和PtrCOBRA11突变体解剖学分析 | 第40-44页 |
4 讨论 | 第44-46页 |
5 结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-57页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
致谢 | 第58-59页 |