| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 植物转脂蛋白概述 | 第11-14页 |
| 1.2.1 植物转脂蛋白结构和分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物脂转运蛋白基因的表达调控 | 第12页 |
| 1.2.3 植物脂转运蛋白的生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.2.3.1 参与蜡质的合成与运输 | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 提高植物抗生物胁迫的能力 | 第13-14页 |
| 1.3 转录因子概述 | 第14-15页 |
| 1.3.1 转录因子的结构 | 第14-15页 |
| 1.3.1.1 DNA结合结构域 | 第14-15页 |
| 1.3.2 植物转录因子分类 | 第15页 |
| 1.4 DNA与蛋白质互作的研究方法 | 第15-18页 |
| 1.4.1 DNA足迹法 | 第16页 |
| 1.4.2 双荧光素酶法 | 第16页 |
| 1.4.3 凝胶迁移实验 | 第16-17页 |
| 1.4.4 染色质免疫沉淀技术 | 第17页 |
| 1.4.5 酵母单杂交技术 | 第17-18页 |
| 1.4.6 DNA与蛋白质互作技术研究进展 | 第18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 ZmLTP3基因核心启动子区域的鉴定 | 第19-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 试验菌株和载体 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器和试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要溶液配方 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 植物表达载体的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.1.1 ZmLTP3基因上游启动子的分段扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 分段扩增的ZmLTP3基因上游启动子的纯化与回收 | 第22页 |
| 2.2.1.3 分段扩增的ZmLTP3基因上游启动子序列和载体双酶切 | 第22页 |
| 2.2.1.4 目的片段和表达载体的纯化与回收 | 第22页 |
| 2.2.1.5 植物表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.2 植物表达载体转化大肠杆菌TOP10 | 第23页 |
| 2.2.3 植物表达载体的提取 | 第23页 |
| 2.2.4 植物表达载体的酶切验证 | 第23-24页 |
| 2.2.5 农杆菌介导法侵染拟南芥 | 第24-27页 |
| 2.2.5.1 拟南芥植株的准备 | 第24页 |
| 2.2.5.2 农杆菌感受态的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.5.3 电击法转化农杆菌感受态细胞 | 第25页 |
| 2.2.5.4 农杆菌PCR验证 | 第25页 |
| 2.2.5.5 农杆菌的集菌与侵染液的配制 | 第25页 |
| 2.2.5.6 农杆菌侵染拟南芥 | 第25-26页 |
| 2.2.5.7 转基因拟南芥种子的筛选 | 第26页 |
| 2.2.5.8 转基因拟南芥DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.5.9 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 拟南芥GUS染色活性分析 | 第27页 |
| 2.3 试验结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.3.1 ZmzLTP3基因上游启动子的分段扩增结果 | 第27-29页 |
| 2.3.2 植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 转基因拟南芥种子的筛选及PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 拟南芥GUS染色活性分析 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第3章 诱饵质粒的构建 | 第33-38页 |
| 3.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 试验菌株和载体 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第33页 |
| 3.1.3 主要溶液配方 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 目的片段的获得 | 第33页 |
| 3.2.1.1 PCR获得目的片段 | 第33页 |
| 3.2.1.2 PCR产物的纯化回收 | 第33页 |
| 3.2.2 诱饵质粒的构建 | 第33-35页 |
| 3.2.2.1 目的片段和诱饵载体(pHIS2质粒)双酶切 | 第33-34页 |
| 3.2.2.2 目的片段和诱饵载体的纯化与回收 | 第34页 |
| 3.2.2.3 诱饵载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.2.4 诱饵质粒转化大肠杆菌TOP10 | 第35页 |
| 3.2.2.5 诱饵质粒的提取 | 第35页 |
| 3.2.2.6 诱饵质粒的鉴定 | 第35页 |
| 3.3 试验结果及分析 | 第35-37页 |
| 3.3.1 目的片段的扩增 | 第35页 |
| 3.3.2 目的片段和pHIS2质粒双酶切 | 第35-36页 |
| 3.3.3 诱饵质粒双酶切验证 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第4章 文库质粒的构建 | 第38-47页 |
| 4.1 试验材料 | 第38页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 4.1.2 试验菌株和载体 | 第38页 |
| 4.1.3 主要试剂和仪器设备 | 第38页 |
| 4.1.4 主要溶液配方 | 第38页 |
| 4.2 试验方法 | 第38-43页 |
| 4.2.1 实验材料的获得 | 第38-39页 |
| 4.2.2 玉米RNA的提取 | 第39页 |
| 4.2.3 mRNA的分离 | 第39页 |
| 4.2.4 cDNA文库的构建 | 第39-41页 |
| 4.2.4.1 cDNA第一条链的合成 | 第39-41页 |
| 4.2.4.2 cDNA第二链的合成 | 第41页 |
| 4.2.5 加5'接头(3个读码框,每个读码框连接一份,共3份) | 第41-42页 |
| 4.2.6 胶回收目的长度的cDNA片段(三个读码框产物合并进行) | 第42页 |
| 4.2.7 cDNA与载体的连接 | 第42页 |
| 4.2.8 电转化大肠杆菌感受态细胞(每2.5ul的重组质粒转化50ul感受态细胞) | 第42-43页 |
| 4.2.9 酵母单杂交文库的构建文库质量鉴定 | 第43页 |
| 4.2.9.1 库容量的鉴定 | 第43页 |
| 4.2.9.2 插入片段大小鉴定 | 第43页 |
| 4.2.10 酵母单杂交文库的质粒抽提 | 第43页 |
| 4.3 试验结果及分析 | 第43-45页 |
| 4.3.1 RNA的提取 | 第43-44页 |
| 4.3.2 mRNA的分离 | 第44-45页 |
| 4.3.3 酵母单杂交文库的构建文库质量鉴定 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第5章 酵母单杂交筛库 | 第47-59页 |
| 5.1 试验材料 | 第47-49页 |
| 5.1.1 试验菌株和载体 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第47页 |
| 5.1.3 主要溶液配方 | 第47-49页 |
| 5.2 试验方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 酵母的转化反应 | 第49页 |
| 5.2.2 酵母感受态制备及转化方法 | 第49-50页 |
| 5.2.3 酵母的自激活检测 | 第50页 |
| 5.2.4 酵母单杂交筛库 | 第50-51页 |
| 5.2.5 阳性克隆PCR鉴定 | 第51页 |
| 5.2.6 酵母阳性克隆质粒的提取和测序比对 | 第51-52页 |
| 5.2.6.1 酵母阳性克隆质粒的提取 | 第51-52页 |
| 5.2.6.2 酵母阳性克隆质粒测序比对 | 第52页 |
| 5.2.6.3 酵母阳性克隆的生物信息学分析 | 第52页 |
| 5.3 试验结果与分析 | 第52-57页 |
| 5.3.1 酵母感受态的制备及转化 | 第52-53页 |
| 5.3.2 酵母自激活检测 | 第53页 |
| 5.3.3 酵母单杂交筛库 | 第53-54页 |
| 5.3.4 酵母阳性克隆质粒测序比对 | 第54-55页 |
| 5.3.5 酵母阳性克隆的生物信息学分析 | 第55-57页 |
| 5.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第6章 ZmLSDI蛋白的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第59-66页 |
| 6.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 6.1.1 试验菌株和载体 | 第59页 |
| 6.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第59页 |
| 6.1.3 主要溶液配方 | 第59-60页 |
| 6.2 试验方法 | 第60-62页 |
| 6.2.1 ZmLSD1蛋白的原核诱导表达 | 第60页 |
| 6.2.2 SDS-PAGE胶的制备 | 第60-61页 |
| 6.2.3 ZmLSD1蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第61-62页 |
| 6.2.4 ZmLSD1蛋白的可溶性检测 | 第62页 |
| 6.3 试验结果与分析 | 第62-64页 |
| 6.3.1 ZmLSD1蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第62-63页 |
| 6.3.2 ZmLSD1蛋白的可溶性鉴定 | 第63-64页 |
| 6.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第7章 结论与展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 个人简介 | 第73-74页 |
