| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 综述 | 第13-26页 |
| 1.1 巴氏杆菌及巴斯德杆菌科 | 第13-16页 |
| 1.1.1 巴斯德杆菌科比较基因组学 | 第13-15页 |
| 1.1.2 巴氏杆菌基因组学 | 第15-16页 |
| 1.2 巴氏杆菌的鉴定和分型 | 第16-17页 |
| 1.2.1 选择培养及菌落形态 | 第16-17页 |
| 1.2.2 巴氏杆菌的血清型及核糖体分型 | 第17页 |
| 1.3 巴氏杆菌致病性 | 第17-19页 |
| 1.3.1 巴氏杆菌流行概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 猪肺炎及萎缩性鼻炎 | 第18页 |
| 1.3.3 巴氏杆菌出血性败血症 | 第18-19页 |
| 1.3.4 禽霍乱 | 第19页 |
| 1.4 巴氏杆菌致病机理 | 第19-23页 |
| 1.4.1 养分的获取 | 第19-22页 |
| 1.4.2 耐药性 | 第22-23页 |
| 1.5 多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,P.multocida)的治疗及预防 | 第23-26页 |
| 1.5.1 抗生素治疗 | 第23页 |
| 1.5.2 P.multocida的预防 | 第23-26页 |
| 第二章 P.multocida保护性抗原基因分子流行病学调查 | 第26-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 P.multocida保护性抗原检测引物的设计、合成及PCR扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.2 P.multocida保护性抗原基因的测序及保守性分析 | 第28页 |
| 2.2.3 P.multocida保护性抗原基因抗原决定簇预测 | 第28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 P.multocida保护抗原基因检测结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 P.multocida保护性抗原基因的测序及保守性分析 | 第29-31页 |
| 2.3.3 保护性抗原基因抗原决定簇的预测 | 第31页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 P.multocida保护性抗原基因重组质粒的构建及原核表达 | 第33-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 质粒及菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-41页 |
| 3.2.1 P.multocida保护性抗原基因表达引物的设计、合成及PCR扩增 | 第34页 |
| 3.2.2 P.multocida保护性抗原基因重组质粒的构建方法 | 第34-36页 |
| 3.2.3 JM109细胞感受态的制备 | 第36页 |
| 3.2.4 重组质粒导入JM109感受态细胞 | 第36页 |
| 3.2.5 P.multocida保护性抗原基因阳性转化子的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.6 将重组质粒导入BL21(DE3)感受态细胞 | 第37页 |
| 3.2.7 重组菌的诱导表达 | 第37页 |
| 3.2.8 可溶性蛋白纯化方法 | 第37-38页 |
| 3.2.9 包涵体蛋白的粗提取、纯化和复性 | 第38页 |
| 3.2.10 BCA法蛋白浓度的测定 | 第38-39页 |
| 3.2.11 疫苗的配制 | 第39-40页 |
| 3.2.12 P.multocida保护性抗原重组蛋白反应原性鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 P.multocida保护性抗原基因扩增结果 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组质粒构建 | 第42-43页 |
| 3.3.3 P.multocida保护性抗原重组蛋白诱导表达结果 | 第43页 |
| 3.3.4 可溶性蛋白(olpB)纯化结果 | 第43-44页 |
| 3.3.5 包涵体蛋白的粗提取和复性 | 第44页 |
| 3.3.6 BCA法蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.7 P.multocida亚单位疫苗配制结果 | 第45-46页 |
| 3.3.8 P.multocida重组蛋白反应原性鉴定(Westernblot) | 第46-47页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第47-51页 |
| 3.4.1 表达引物设计 | 第47-48页 |
| 3.4.2 重组质粒构建 | 第48页 |
| 3.4.3 表达条件摸索及包涵体/可溶性表达 | 第48-49页 |
| 3.4.4 包涵体粗提取及复性 | 第49页 |
| 3.4.5 亚单位疫苗的配制 | 第49-50页 |
| 3.4.6 免疫印迹实验 | 第50-51页 |
| 第四章 P.multocida重组蛋白的小鼠免疫保护实验 | 第51-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.2.1 小鼠免疫程序的制定 | 第51页 |
| 4.2.2 免疫后小鼠多杀性巴氏杆菌特异性抗体ELISA检测 | 第51页 |
| 4.2.3 A型P.multocida小鼠攻毒预实验 | 第51-52页 |
| 4.2.4 小鼠滴鼻攻毒实验方法 | 第52页 |
| 4.2.5 腹腔注射攻毒实验方法 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 4.3.1 免疫前后小鼠体重增长情况 | 第52-53页 |
| 4.3.2 免疫后小鼠多杀性巴氏杆菌特异性抗体ELISA检测结果 | 第53页 |
| 4.3.3 A型P.multocida小鼠滴鼻/腹腔注射攻毒剂量摸索 | 第53-54页 |
| 4.3.4 滴鼻攻毒实验结果 | 第54-55页 |
| 4.3.5 腹腔注射攻毒实验结果 | 第55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.4.1 疫苗免疫后增重情况 | 第55-56页 |
| 4.4.2 小鼠攻毒预实验讨论 | 第56页 |
| 4.4.3 免疫后抗体水平及保护效果讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 在读期间科研成果 | 第71页 |
