| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩写对照 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 癌症研究发展现状 | 第12-13页 |
| 1.3 癌症发生的原因 | 第13页 |
| 1.4 重要的抑癌基因 | 第13-14页 |
| 1.5 肿瘤治疗方法的进展 | 第14-15页 |
| 1.6 肿瘤疾病动物模型及构建方法 | 第15-17页 |
| 1.7 基因编辑技术 | 第17-18页 |
| 1.8 本实验的研究目的与内容 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器与器材 | 第21-22页 |
| 2.1.4 sgRNA正义/反义序列 | 第22页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第22页 |
| 2.1.6 主要试剂配方 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 获得用于构建sgRNA表达质粒的引物 | 第23页 |
| 2.2.2 获取sgRNA插入片段 | 第23页 |
| 2.2.3 CRISPR质粒载体的获得 | 第23-24页 |
| 2.2.4 将sgRNA插入片段与CRISPR质粒载体连接 | 第24-25页 |
| 2.2.5 连接产物转化 | 第25页 |
| 2.2.6 提取并鉴定sgRNA-Cas9表达质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.7 质粒大量提取 | 第26页 |
| 2.2.8 293T细胞复苏、培养与传代 | 第26-27页 |
| 2.2.9 sgRNA-Cas9表达质粒载体转染 | 第27-28页 |
| 2.2.10 分选质粒转染成功的细胞 | 第28页 |
| 2.2.11 流式检测转染细胞 | 第28页 |
| 2.2.12 基因组DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.13 包含突变位点的基因组片段PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.14 待测序回收产物克隆与突变效率检测 | 第29-30页 |
| 2.3 实验流程模式图 | 第30页 |
| 2.4 数据处理 | 第30-31页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第31-36页 |
| 3.1 p53/PTEN sgRNA靶点选择 | 第31-32页 |
| 3.2 表达sgRNA与Cas9-P2A-GFP的CRISPR质粒导入细胞 | 第32-33页 |
| 3.3 通过PCR、电泳及胶回收的方式对待检测序列进行纯化 | 第33页 |
| 3.4 通过测序的方法验证基因突变情况 | 第33-36页 |
| 第4章 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
