| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 英文缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-26页 |
| 1.1 骨肉瘤的诊治现状 | 第20-22页 |
| 1.2 微小RNA的研究概况 | 第22-23页 |
| 1.3 骨肉瘤相关微小RNA的研究情况 | 第23-25页 |
| 1.4 ROR2与骨肉瘤 | 第25-26页 |
| 第二章 MIR-208B在骨肉瘤组织和细胞系中的表达及其对人骨肉瘤细胞生长和增殖的影响 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 骨肉瘤组织标本 | 第26页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要仪器和耗材 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.2.1 细胞复苏、培养和冻存 | 第28-29页 |
| 2.2.2 mirVana~(TM) miRNA Isolation Kit分离大片段RNA和小段RNA | 第29-31页 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测miR-208b在骨肉瘤组织和正常骨组织、骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞、人正常成骨细胞系NHOst中的表达水平 | 第31-32页 |
| 2.2.4 细胞转染效率检测 | 第32-33页 |
| 2.2.5 qRT-PCR检测骨肉瘤U2OS、Saos-2细胞在转染miR-208b mimics后的miR-208b的表达水平 | 第33-34页 |
| 2.2.6 CCK-8试剂盒检测骨肉瘤U2OS和Saos -2细胞的增殖活性 | 第34-35页 |
| 2.2.7 平板克隆形成实验检测miR-208b对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞克隆形成能力的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.8 流式细胞仪(FCM)检测过表达miR-208b对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞周期的影响 | 第36-37页 |
| 2.2.9 构建裸鼠皮下骨肉瘤移植瘤模型 | 第37页 |
| 2.3 统计学方法 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-46页 |
| 2.4.1 MiR-208b在骨肉瘤组织和正常骨组织、人骨肉瘤细胞细胞系U2OS、Saos-2和人正常成骨细胞系NHOST中的表达 | 第38-39页 |
| 2.4.2 骨肉瘤U2OS、Saos-2细胞中过表达miP-208b的效果检测 | 第39-40页 |
| 2.4.3 过表达miR-208b抑制骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞的生长 | 第40-41页 |
| 2.4.4 过表达miR-208b抑制骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞的克隆形成能力 | 第41-42页 |
| 2.4.5 过表达miR-208b对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞的细胞周期的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.6 动物实验 | 第44-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-49页 |
| 2.6 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 MIR-208B对人骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第50-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 划痕愈合实验检测过表达miR-208b对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞迁移能力的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.2 Transwell侵袭实验检测过表达miR-208b对骨肉瘤U20S和Saos-2细胞侵袭能力的影响 | 第52-53页 |
| 3.3 统计学方法 | 第53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.4.1 过表达miR-208b抑制骨肉瘤U20S和Saos-2细胞的迁移能力 | 第53-54页 |
| 3.4.2 过表达miR-208b抑制骨肉瘤U20S和Saos-2细胞的侵袭能力 | 第54-55页 |
| 3.4.3 过表达miR-208b抑制C-myc和p-JNK蛋白的表达 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-57页 |
| 3.6 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 ROR2是MIR-208B的直接靶基因及其对人骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响 | 第58-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第58-60页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第58页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第58-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-66页 |
| 4.2.1 双荧光素酶报告载体实验鉴定miR-208b的靶基因 | 第60-63页 |
| 4.2.2 Western blot检测靶基因ROR2蛋白的表达 | 第63-66页 |
| 4.2.3 骨肉瘤U2OS、Saos-2细胞中沉默ROR2蛋白表达的效果检测 | 第66页 |
| 4.2.4 沉默ROR2的蛋白表达对人骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响 | 第66页 |
| 4.3 统计学方法 | 第66-67页 |
| 4.4 实验结果 | 第67-76页 |
| 4.4.1 MiR-208b靶基因鉴定 | 第67-71页 |
| 4.4.2 沉默ROR2表达对骨肉瘤细胞增殖的影响 | 第71-75页 |
| 4.4.3 沉默ROR2的表达对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响 | 第75-76页 |
| 4.5 讨论 | 第76-79页 |
| 4.6 小结 | 第79-80页 |
| 第五章 MIR-208B通过下调ROR2抑制人骨肉瘤细胞的增殖、迁移及侵袭 | 第80-90页 |
| 5.1 实验方法 | 第80页 |
| 5.2 实验结果 | 第80-87页 |
| 5.2.1 过表达ROR2升高人骨肉瘤细胞内的ROR2表达量 | 第80-82页 |
| 5.2.2 MiR-208b通过下调ROR2抑制人骨肉瘤细胞的增殖 | 第82-84页 |
| 5.2.3 MiR-208b通过下调ROR2抑制人骨肉瘤细胞的迁移 | 第84-85页 |
| 5.2.4 MiR-208b通过下调ROR2抑制人骨肉瘤细胞的侵袭 | 第85-86页 |
| 5.2.5 过表达ROR2恢复骨肉瘤细胞内Cyclin D1、Cyclin E、C-myc、p-JNK的表达量 | 第86-87页 |
| 5.3 讨论 | 第87-89页 |
| 5.4 小结 | 第89-90页 |
| 第六章 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附录 博士期间表的文章 | 第101-102页 |
| 综述 MicroRNA在骨肉瘤中的研究进展 | 第102-115页 |
| 参考文献 | 第110-115页 |
