| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 病原学分类 | 第14页 |
| 1.2 生活史 | 第14-15页 |
| 1.3 流行区域 | 第15-16页 |
| 1.4 诊断方法 | 第16-19页 |
| 1.4.1 血涂片法 | 第16页 |
| 1.4.2 分子学诊断 | 第16-18页 |
| 1.4.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第16-17页 |
| 1.4.2.2 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) | 第17页 |
| 1.4.2.3 环介导等温扩增技术(LAMP) | 第17页 |
| 1.4.2.4 反向线性印记技术(RLB) | 第17页 |
| 1.4.2.5 实时荧光定量PCR(REAL-TIMEQPCR) | 第17-18页 |
| 1.4.3 血清学诊断 | 第18-19页 |
| 1.4.3.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第18页 |
| 1.4.3.2 补体结合试验 | 第18页 |
| 1.4.3.3 免疫胶体金快速层析技术 | 第18-19页 |
| 1.5 MPSP基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 中华泰勒虫MPSP基因的克隆表达及反应原性检测 | 第21-30页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 虫株与血清 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 中华泰勒虫基因组的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 引物的合成 | 第22页 |
| 2.2.3 MPSP基因的扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PGEM-T-EASY/MPSP重组质粒的构建 | 第23页 |
| 2.2.5 PET-28A/MPSP表达质粒的构建 | 第23页 |
| 2.2.6 重组蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.2.7 蛋白的纯化 | 第24页 |
| 2.2.8 蛋白的浓缩及浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.2.9 反应原性分析 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 MPSP基因的扩增 | 第25页 |
| 2.3.2 PET-28A-MPSP重组质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.3 PET-28A/MPSP蛋白的表达及纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.4 蛋白的浓缩及浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 重组MPSP蛋白反应原性的分析 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 MPSP蛋白多克隆抗体的制备及纯化鉴定 | 第30-35页 |
| 3.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 抗原制备 | 第30页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 抗体制备 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 实验动物准备 | 第30-31页 |
| 3.2.1.2 免疫前阴性血清采集 | 第31页 |
| 3.2.1.3 抗原乳化 | 第31页 |
| 3.2.1.4 抗原注射 | 第31页 |
| 3.2.1.5 免疫后血清 | 第31页 |
| 3.2.2 抗体的纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.3 酶联免疫吸附试验测定MPSP抗体效价 | 第32页 |
| 3.3 结果 | 第32-34页 |
| 3.3.1 抗体的纯化 | 第32-33页 |
| 3.3.2 MPSP血清抗体效价的测定 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 牛泰勒虫病免疫胶体金检测试纸条的制备 | 第35-44页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第35页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂及材料 | 第35页 |
| 4.1.3 血清与样品 | 第35页 |
| 4.2 方法 | 第35-39页 |
| 4.2.1 胶体金的制备 | 第35-36页 |
| 4.2.2 胶体金标记抗原最佳用量的确定 | 第36页 |
| 4.2.3 胶体金标记抗原最适PH的确定 | 第36页 |
| 4.2.4 金标抗原的制备 | 第36页 |
| 4.2.5 金标抗原工作浓度的确定 | 第36页 |
| 4.2.6 确定检测带及质控带的工作浓度 | 第36-37页 |
| 4.2.7 免疫胶体金试纸条的制备 | 第37页 |
| 4.2.8 免疫胶体金试纸条的应用及结果判定 | 第37-38页 |
| 4.2.8.1 待检样品处理 | 第37页 |
| 4.2.8.2 检测方法 | 第37页 |
| 4.2.8.3 结果判定 | 第37-38页 |
| 4.2.9 试纸条评价试验 | 第38-39页 |
| 4.2.9.1 特异性试验 | 第38页 |
| 4.2.9.2 敏感性试验 | 第38页 |
| 4.2.9.3 试纸条批内和批间重复性试验 | 第38页 |
| 4.2.9.4 试纸条检测性能的评价 | 第38-39页 |
| 4.3 结果 | 第39-41页 |
| 4.3.1 胶体金标记抗原最适用量及PH的确定 | 第39页 |
| 4.3.2 试纸条检测带及质控带抗原、抗体工作浓度的确定 | 第39页 |
| 4.3.3 特异性试验 | 第39-40页 |
| 4.3.4 敏感性试验 | 第40-41页 |
| 4.3.5 批内批间重复性试验 | 第41页 |
| 4.3.6 检测性能的评价 | 第41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第五章 免疫胶体金试纸条在野外样品检测中的应用效果评价 | 第44-48页 |
| 5.1 材料 | 第44页 |
| 5.1.1 血清样品 | 第44页 |
| 5.1.2 抗原、试剂 | 第44页 |
| 5.1.3 基因组及对照血清 | 第44页 |
| 5.2 方法 | 第44-45页 |
| 5.2.1 免疫胶体金试纸条检测程序 | 第44-45页 |
| 5.2.2 间接ELISA方法检测程序 | 第45页 |
| 5.2.3 免疫胶体金试纸条与ELISA方法检测结果的比对 | 第45页 |
| 5.3 结果 | 第45-46页 |
| 5.3.1 免疫胶体金试纸条检测方法对野外样品的检测 | 第45-46页 |
| 5.3.2 RMPSP-ELISA方法对甘南地区野外样品的检测 | 第46页 |
| 5.3.3 免疫胶体金试纸条与RMPSP-ELISA检测方法结果的对比 | 第46页 |
| 5.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第六章 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
