| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 1 立题依据 | 第15-17页 |
| 1.1 甘草药材市场需求巨大 | 第15页 |
| 1.2 栽培甘草质量普遍偏低 | 第15页 |
| 1.3 甘草中黄酮类化合物具有众多药理活性和药用潜力 | 第15页 |
| 1.4 功能基因多态性是影响栽培甘草黄酮类化合物生物合成的重要分子基础 | 第15-17页 |
| 2 研究思路与方法 | 第17-20页 |
| 2.1 研究目标 | 第17页 |
| 2.2 研究内容 | 第17-19页 |
| 2.3 技术路线 | 第19-20页 |
| 文献综述 | 第20-25页 |
| 1 黄酮类化合物的研究现状 | 第20-21页 |
| 1.1 黄酮类化合物的分类 | 第20页 |
| 1.2 黄酮类化合物的生物学功能及药理活性研究概况 | 第20页 |
| 1.3 黄酮类化合物代谢途径中功能基因的研究概况 | 第20-21页 |
| 2 甘草黄酮类化合物的研究概况 | 第21-22页 |
| 2.1 甘草中黄酮类化合物及其药理活性研究概况 | 第21页 |
| 2.2 甘草黄酮类化合物代谢途径中功能基因的研究概况 | 第21-22页 |
| 3 CHS基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 3.1 CHS基因结构的研究概况 | 第22页 |
| 3.2 CHS基因表达调控的研究概况 | 第22页 |
| 3.3 CHS功能的研究概况 | 第22-23页 |
| 3.4 CHS基因进化的研究概况 | 第23页 |
| 4 甘草中CHS基因的研究概况 | 第23-25页 |
| 第一章 三基原甘草样品中主要黄酮类化合物的含量分析 | 第25-37页 |
| 1 实验材料 | 第25页 |
| 1.1 植物材料 | 第25页 |
| 1.2 试剂 | 第25页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.1 色谱条件 | 第25-26页 |
| 2.2 对照品溶液的制备 | 第26页 |
| 2.3 供试品溶液的制备 | 第26页 |
| 2.4 线性关系考察 | 第26页 |
| 2.5 方法学考察 | 第26页 |
| 2.6 样品测定 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-36页 |
| 3.1 标准曲线的建立 | 第27页 |
| 3.2 甘草样品中4种黄酮类化合物的含量分析 | 第27-32页 |
| 3.3 相关性分析 | 第32-33页 |
| 3.4 差异性检验 | 第33-36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 甘草查尔酮合酶基因多态性研究 | 第37-69页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 植物材料 | 第37页 |
| 1.2 试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.1 甘草总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2 逆转录 | 第39-40页 |
| 2.3 甘草CHS基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.4 目的片段胶回收 | 第41-42页 |
| 2.5 连接、转化及阳性克隆筛选 | 第42-43页 |
| 2.6 测序 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-67页 |
| 3.1 甘草总RNA提取结果 | 第43页 |
| 3.2 目的基因PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| 3.3 阳性克隆筛选结果 | 第44-45页 |
| 3.4 测序结果分析 | 第45-67页 |
| 4 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 甘草黄酮高/低含量组特异CHS氨基酸序列的生物信息学分析 | 第69-76页 |
| 1 实验材料 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-70页 |
| 2.1 物理化学性质分析 | 第69页 |
| 2.2 二级结构比对分析 | 第69页 |
| 2.3 三级结构比对分析 | 第69页 |
| 2.4 CHS氨基酸序列聚类分析 | 第69-70页 |
| 3 实验结果 | 第70-74页 |
| 3.1 物理化学性质分析结果 | 第70页 |
| 3.2 二级结构比对分析结果 | 第70-71页 |
| 3.3 三级结构比对分析结果 | 第71-73页 |
| 3.4 CHS氨基酸序列聚类分析结果 | 第73-74页 |
| 4 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 转甘草特异性CHS基因酵母表达载体的构建 | 第76-89页 |
| 1 实验材料 | 第76-77页 |
| 1.1 质粒与菌株 | 第76页 |
| 1.2 试剂 | 第76页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第76-77页 |
| 2 实验方法 | 第77-80页 |
| 2.1 含甘草特异性CHS基因大肠杆菌工程菌的活化及重组T质粒提取 | 第77-78页 |
| 2.2 表达载体pPIC9K酶切位点分析 | 第78页 |
| 2.3 带酶切位点甘草CHS基因的PCR扩增 | 第78-79页 |
| 2.4 PCR产物胶回收、T连接、转化、阳性克隆筛选及测序 | 第79页 |
| 2.5 CHS基因的双酶切 | 第79页 |
| 2.6 目的基因与表达载体pPIC9K双酶切产物连接 | 第79-80页 |
| 2.7 连接产物转化、阳性克隆筛选及测序 | 第80页 |
| 3 实验结果 | 第80-87页 |
| 3.1 带酶切位点的甘草CHS基因扩增结果 | 第80-81页 |
| 3.2 携带甘草CHS基因的重组T质粒提取结果 | 第81-82页 |
| 3.3 双酶切结果 | 第82-83页 |
| 3.4 连接转化后阳性克隆筛选结果 | 第83页 |
| 3.5 测序结果 | 第83-87页 |
| 4 小结与讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 转甘草特异性CHS基因酵母工程菌的构建 | 第89-102页 |
| 1 实验材料 | 第89-90页 |
| 1.1 质粒与菌株 | 第89页 |
| 1.2 试剂 | 第89-90页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第90页 |
| 2 实验方法 | 第90-94页 |
| 2.1 转甘草特异性CHS基因酵母表达载体的线性化酶切 | 第90-91页 |
| 2.2 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第91页 |
| 2.3 转化 | 第91-92页 |
| 2.4 转甘草特异性CHS基因毕赤酵母GS115工程菌的筛选 | 第92-94页 |
| 3 实验结果 | 第94-100页 |
| 3.1 重组质粒线性化酶切结果 | 第94-95页 |
| 3.2 His~+转化子筛选结果 | 第95页 |
| 3.3 遗传霉素G418筛选结果 | 第95-96页 |
| 3.4 Mut~+型重组子筛选结果 | 第96页 |
| 3.5 重组转化子的PCR验证结果 | 第96-100页 |
| 4 小结与讨论 | 第100-102页 |
| 第六章 转甘草特异性CHS基因酵母工程菌的诱导表达 | 第102-109页 |
| 1 实验材料 | 第102-103页 |
| 1.1 质粒与菌株 | 第102页 |
| 1.2 试剂 | 第102-103页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第103页 |
| 2 实验方法 | 第103-107页 |
| 2.1 转甘草特异性CHS基因酵母工程菌的诱导表达 | 第103-104页 |
| 2.2 表达蛋白的透析脱盐 | 第104-105页 |
| 2.3 表达蛋白的浓缩富集 | 第105页 |
| 2.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第105-107页 |
| 3 实验结果 | 第107-108页 |
| 3.1 诱导表达结果 | 第107页 |
| 3.2 SDS-PAGE电泳检测结果 | 第107-108页 |
| 4 小结与讨论 | 第108-109页 |
| 第七章 总结与展望 | 第109-113页 |
| 1 总结 | 第109-111页 |
| 2 展望 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 个人简介 | 第122-123页 |
