| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 小球藻病毒及其宿主 | 第12-14页 |
| 1.3 泛素-蛋白酶体系统 | 第14-16页 |
| 1.4 泛素连接酶E3 | 第16-17页 |
| 1.5 酵母双杂交技术 | 第17-18页 |
| 1.6 超氧化物歧化酶 | 第18-19页 |
| 1.7 CU,ZN-SOD活性的测定方法 | 第19页 |
| 1.8 邻苯三酚自氧化法 | 第19-20页 |
| 1.9 国内外研究进展 | 第20页 |
| 1.10 研究意义 | 第20-22页 |
| 第2章 病毒PBCV-1的感染分离与纯化 | 第22-27页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 藻株与病毒株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 小球藻NC64A培养 | 第23页 |
| 2.2.2 病毒PBCV-1感染 | 第23-24页 |
| 2.2.3 病毒提取与纯化 | 第24页 |
| 2.2.4 病毒效价的测定 | 第24-25页 |
| 2.3 试验结果 | 第25-26页 |
| 2.3.1 病毒感染结果 | 第25页 |
| 2.3.2 病毒纯化结果 | 第25-26页 |
| 2.3.3 病毒效价测定结果 | 第26页 |
| 2.4 本章小结 | 第26-27页 |
| 第3章 病毒蛋白的表达及与宿主蛋白的PULLDOWN实验 | 第27-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 菌株 | 第27页 |
| 3.1.2 培养基与试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 仪器 | 第28页 |
| 3.2 试验方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 PCR扩增cvSkp1和A607R片段 | 第28-29页 |
| 3.2.2 PCR产物与载体pET23a(+)的酶切与连接 | 第29页 |
| 3.2.3 连接产物的转化和质粒提取 | 第29-30页 |
| 3.2.4 菌体感受态的制备 | 第30-31页 |
| 3.2.5 质粒转化 | 第31页 |
| 3.2.6 菌体活化 | 第31页 |
| 3.2.7 蛋白小量诱导表达(50mL) | 第31页 |
| 3.2.8 蛋白纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.9 cvSkp1蛋白的大量制备 | 第32页 |
| 3.2.10 病毒PBCV-1感染的小球藻NC64A裂解液的制备 | 第32页 |
| 3.2.11 Pulldown实验 | 第32页 |
| 3.2.12 快速银染实验 | 第32-33页 |
| 3.2.13 质谱检测 | 第33页 |
| 3.3 试验结果 | 第33-36页 |
| 3.3.1 pET23a(+)-cvSkp1、pET23a(+)-A607R基因克隆和质粒构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 pET23a(+)-cvSkp1和pET23a(+)-A607R蛋白表达和纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.3 Pulldown实验 | 第35-36页 |
| 3.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第4章 酵母双杂交验证试验 | 第37-46页 |
| 4.1 试验材料 | 第37-39页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 4.1.2 培养基和试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 引物 | 第38-39页 |
| 4.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 融合蛋白基因优化合成以及片段的扩增 | 第39-40页 |
| 4.2.2 PCR产物与载体的酶切与连接 | 第40-41页 |
| 4.2.3 连接产物的转化和质粒提取 | 第41页 |
| 4.2.4 酵母感受态的制备及酵母转化 | 第41页 |
| 4.2.5 选择培养基验证 | 第41-42页 |
| 4.3 试验结果 | 第42-45页 |
| 4.3.1 融合蛋白基因优化合成以及片段的扩增 | 第42-43页 |
| 4.3.2 酵母双杂交工作质粒的构建 | 第43页 |
| 4.3.3 酵母转化 | 第43-45页 |
| 4.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第5章 病毒PBCV-1的SOD酶的表达纯化及活性测定 | 第46-51页 |
| 5.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 5.1.1 菌株 | 第46页 |
| 5.1.2 培养基和试剂 | 第46-47页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 病毒Cu,Zn-SOD蛋白的纯化 | 第47页 |
| 5.2.2 酶活的测定 | 第47-48页 |
| 5.3 实验结果 | 第48-50页 |
| 5.3.1 邻苯三酚在Tris-HCl缓冲液中自氧化吸收峰的确定 | 第48-49页 |
| 5.3.2 邻苯三酚自氧化速率的确定 | 第49页 |
| 5.3.3 病毒SOD活性测定结果 | 第49-50页 |
| 5.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第6章 病毒CU,ZN-SOD部分酶学性质的测定 | 第51-55页 |
| 6.1 实验材料 | 第51页 |
| 6.2 实验方法 | 第51页 |
| 6.3 实验结果 | 第51-54页 |
| 6.3.1 温度对vSOD活性的影响 | 第51-52页 |
| 6.3.2 pH对vSOD活性的影响 | 第52页 |
| 6.3.3 SDS对vSOD活性的影响 | 第52-53页 |
| 6.3.4 尿素对vSOD活性的影响 | 第53页 |
| 6.3.5 盐酸胍对vSOD活性的影响 | 第53-54页 |
| 6.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第7章 结论与讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第62页 |
