| 符号说明 | 第5-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第16-42页 |
| 1.1 DnaJ蛋白研究进展 | 第16-25页 |
| 1.1.1 DnaJ蛋白的结构 | 第16-18页 |
| 1.1.2 DnaJ蛋白的分类 | 第18-19页 |
| 1.1.3 DaaJ蛋白的分布 | 第19-20页 |
| 1.1.4 DnaJ蛋白的作用机制 | 第20-22页 |
| 1.1.5 DnaJ蛋白在叶绿体中的功能研究 | 第22-25页 |
| 1.1.5.1 光合作用 | 第22-23页 |
| 1.1.5.2 叶绿体发育 | 第23-24页 |
| 1.1.5.3 蛋白转运 | 第24-25页 |
| 1.1.5.4 逆境响应 | 第25页 |
| 1.2 低温对植物的影响 | 第25-30页 |
| 1.2.1 低温对植物光合作用的影响 | 第26-27页 |
| 1.2.2 低温对植物生物膜的影响 | 第27-28页 |
| 1.2.3 低温对植物ROS产生和清除的影响 | 第28-30页 |
| 1.2.3.1 ROS的产生 | 第28-29页 |
| 1.2.3.2 ROS的清除 | 第29-30页 |
| 1.3 高温对植物的影响 | 第30-32页 |
| 1.3.1 高温对植物光合作用的影响 | 第30-31页 |
| 1.3.2 高温对植物生物膜的影响 | 第31页 |
| 1.3.3 高温对植物ROS产生和清除的影响 | 第31-32页 |
| 1.4 PSⅡ的修复循环 | 第32-40页 |
| 1.4.1 PSⅡ的结构和功能 | 第32-34页 |
| 1.4.2 PSⅡ的光抑制 | 第34-35页 |
| 1.4.3 PSⅡ的修复循环 | 第35-38页 |
| 1.4.4 参与PSⅡ修复循环的蛋白质 | 第38-40页 |
| 1.4.4.1 分子伴侣系统参与PSⅡ的修复循环 | 第38-39页 |
| 1.4.4.2 蛋白酶参与PSII的修复循环 | 第39页 |
| 1.4.4.3 ALB参与PSII的修复循环 | 第39-40页 |
| 1.4.4.4 LPA参与PSII的修复循环 | 第40页 |
| 1.5 本研究的目的及其意义 | 第40-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 2.1.2 材料处理 | 第42页 |
| 2.1.3 菌株与载体 | 第42页 |
| 2.1.4 酶与各种生化试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-67页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第44页 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.3 番茄LeCDJ1基因的克隆 | 第45-46页 |
| 2.2.4 目的片段的回收 | 第46页 |
| 2.2.5 目的片段与克隆载体的连接 | 第46-47页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 2.2.7 转化及克隆筛选 | 第47页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第47-48页 |
| 2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定 | 第48页 |
| 2.2.10 LeCDJ1的亚细胞定位 | 第48-50页 |
| 2.2.10.1 pBI122-LeCDJ1-GFP表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.2.10.2 原生质体的分离步骤 | 第49页 |
| 2.2.10.3 转化原生质体 | 第49-50页 |
| 2.2.11 酵母双杂交 | 第50-51页 |
| 2.2.11.1 表达载体的构建 | 第50页 |
| 2.2.11.2 乙酸锂法制备酵母感受态细胞 | 第50页 |
| 2.2.11.3 酵母感受态细胞的转化 | 第50-51页 |
| 2.2.11.4 确定结果并作图 | 第51页 |
| 2.2.12 实时定量荧光PCR | 第51-52页 |
| 2.2.13 Northern杂交 | 第52-54页 |
| 2.2.13.1 RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第52页 |
| 2.2.13.2 转膜 | 第52-53页 |
| 2.2.13.3 预杂交 | 第53页 |
| 2.2.13.4 探针的制备 | 第53-54页 |
| 2.2.13.5 杂交 | 第54页 |
| 2.2.14 LeCDJ1蛋白原核表达及Western杂交 | 第54-59页 |
| 2.2.14.1 原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 2.2.14.2 大肠杆菌BL21原核表达 | 第54页 |
| 2.2.14.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第54-55页 |
| 2.2.14.4 原核表达蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 2.2.14.5 抗体的制备 | 第56页 |
| 2.2.14.6 抗血清效价的测定(试管微量沉淀法) | 第56页 |
| 2.2.14.7 Western杂交 | 第56-59页 |
| 2.2.15 真核表达载体的构建及番茄转化 | 第59-62页 |
| 2.2.15.1 正、反义表达载体的构建 | 第59页 |
| 2.2.15.2 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备和转化 | 第59-60页 |
| 2.2.15.3 农杆菌介导转化番茄 | 第60-62页 |
| 2.2.16 转基因番茄植株的检测 | 第62-63页 |
| 2.2.16.1 CTAB微量法提取基因组DNA | 第62页 |
| 2.2.16.2 转基因植株的PCR检测 | 第62页 |
| 2.2.16.3 转基因植株的qRT-PCR分析 | 第62-63页 |
| 2.2.16.4 转基因植株的Western blot分析 | 第63页 |
| 2.2.17 转基因番茄生理指标的测定 | 第63-67页 |
| 2.2.17.1 叶绿素含量的测定 | 第63页 |
| 2.2.17.2 植株生长量测定 | 第63页 |
| 2.2.17.3 叶片台盼蓝染色分析 | 第63页 |
| 2.2.17.4 电解质外渗量测定、膜脂过氧化程度分析 | 第63-64页 |
| 2.2.17.5 DAB和NBT染色分析 | 第64页 |
| 2.2.17.6 O_2~-与H_2O_2的测定 | 第64页 |
| 2.2.17.7 APX和SOD酶活性的测定 | 第64-65页 |
| 2.2.17.8 叶绿素荧光参数测定 | 第65页 |
| 2.2.17.9 类囊体膜的制备及D1蛋白Western | 第65页 |
| 2.2.17.10 BN-PAGE | 第65-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-94页 |
| 3.1 LeCDJ1基因的分离及其特征 | 第67-72页 |
| 3.1.1 LeCDJ1基因全长cDNA序列的克隆 | 第67页 |
| 3.1.2 LeCDJ1基因的序列分析及其编码的蛋白质序列分析 | 第67-70页 |
| 3.1.3 LeCDJ1和cpHsp70的亚细胞定位的软件预测 | 第70页 |
| 3.1.4 LeCDJ1-GFP融合蛋白的亚细胞定位分析 | 第70-71页 |
| 3.1.5 LeCDJ1-cpHsp70互作的酵母双杂交分析 | 第71-72页 |
| 3.2 LeCDJ1基因在大肠杆菌中的表达 | 第72-74页 |
| 3.2.1 原核表达载体pET-LeCDJ1的构建 | 第72页 |
| 3.2.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第72-74页 |
| 3.3 LeCDJ1基因在番茄中的表达分析 | 第74-77页 |
| 3.3.1 LeCDJ1基因在番茄不同器官中的表达 | 第74页 |
| 3.3.2 LeCDJ1基因受低温诱导表达 | 第74-75页 |
| 3.3.3 LeCDJ1基因受高温诱导表达 | 第75-76页 |
| 3.3.4 LeCDJ1基因在其它逆境胁迫及信号物质下的表达分析 | 第76-77页 |
| 3.4 LeCDJ1基因在番茄中的遗传转化 | 第77-80页 |
| 3.4.1 正、反义表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 3.4.2 转LeCDJ1基因植株的鉴定 | 第78-80页 |
| 3.5 过表达LeCDJ1基因提高了番茄植株的耐冷性 | 第80-86页 |
| 3.5.1 低温胁迫下番茄幼苗及成苗的生长情况 | 第80-81页 |
| 3.5.2 过表达LeCDJ1基因提高番茄耐冷性的机理分析 | 第81-86页 |
| 3.5.2.1 过表达LeCDJ1提高了低温胁迫下生物膜的稳定性 | 第81-82页 |
| 3.5.2.2 过表达LeCDJ1降低了O_2~-和H_2O_2的积累 | 第82-83页 |
| 3.5.2.3 过表达LeCDJ1降低了低温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第83页 |
| 3.5.2.4 SM存在下,过表达LeCDJ1降低了低温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第83-85页 |
| 3.5.2.5 过表达LeCDJ1提高低温胁迫下PSⅡ复合体的稳定性 | 第85-86页 |
| 3.6 过表达LeCDJ1基因提高了番茄植株的耐热性 | 第86-94页 |
| 3.6.1 高温胁迫下番茄幼苗及成苗的生长情况 | 第86-88页 |
| 3.6.2 过表达LeCDJ1基因提高番茄耐热性的机理分析 | 第88-94页 |
| 3.6.2.1 过表达LeCDJ1降低了高温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第88-89页 |
| 3.6.2.2 SM存在下,过表达LeCDJ1降低高温胁迫下PSⅡ的光抑制 | 第89-91页 |
| 3.6.2.3 过表达LeCDJ1降低了高温胁迫下O_2~-和H_2O_2的积累 | 第91页 |
| 3.6.2.4 过表达LeCDJ1维持较高的APX和SOD酶活性 | 第91-94页 |
| 4 讨论 | 第94-102页 |
| 4.1 LeCDJ1基因编码一个叶绿体定位的Ⅲ型DnaJ蛋白 | 第94-95页 |
| 4.2 过表达LeCDJ1提高了转基因番茄的低温抗性 | 第95-96页 |
| 4.3 过表达LeCDJ1维持低温条件下PSH的稳定性 | 第96-99页 |
| 4.4 过表达LeCDJ1提高了转基因番茄的高温抗性 | 第99页 |
| 4.5 过表达LeCDJ1维持高温条件下APX和SOD的酶活性 | 第99-100页 |
| 4.6 LeCDJ1的作用机制初探 | 第100-102页 |
| 5 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第120页 |
