| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第12-16页 |
| 1.1 逆转座子LINE-1概述 | 第12-14页 |
| 1.2 Argonaute蛋白概述 | 第14页 |
| 1.3 研究策略 | 第14-16页 |
| 2 实验材料、实验仪器与试剂配制 | 第16-19页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.2 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.3 试剂配制 | 第17-19页 |
| 3 实验方法 | 第19-32页 |
| 3.1 细胞培养 | 第19-20页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第19页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第19-20页 |
| 3.1.4 收细胞 | 第20页 |
| 3.2 AGO2 RNAi 载体的构建 | 第20-26页 |
| 3.2.1 RNAi载体构建示意图及发卡siRNA模板的设计 | 第20-21页 |
| 3.2.2 目的基因片段的选择 | 第21-24页 |
| 3.2.3 质粒双酶切 | 第24页 |
| 3.2.4 双酶切载体的回收 | 第24页 |
| 3.2.5 DNA 退火 | 第24-25页 |
| 3.2.6 载体连接 | 第25页 |
| 3.2.7 转化 | 第25-26页 |
| 3.2.8 阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| 3.3 质粒的提取 | 第26-27页 |
| 3.4 质粒的转染 | 第27-28页 |
| 3.5 Western Blot | 第28-29页 |
| 3.6 免疫共沉淀 | 第29-30页 |
| 3.7 荧光素酶的测定 | 第30-31页 |
| 3.7.1 检测样品的制备 | 第30页 |
| 3.7.2 荧光素酶强度的测定 | 第30页 |
| 3.7.3 β-gal的测定 | 第30-31页 |
| 3.8 数据统计学分析 | 第31-32页 |
| 4 实验结果 | 第32-41页 |
| 4.1 AGO2 RNAi 重组表达载体的鉴定 | 第32-36页 |
| 4.1.1 菌液PCR及测序鉴定 | 第32-35页 |
| 4.1.2 转染细胞中AGO2下调的验证 | 第35-36页 |
| 4.2 下调AGO2对L1-5'UTR启动子活性的影响 | 第36-37页 |
| 4.3 L1-ORF1p对L1-5'UTR启动子活性的影响 | 第37-39页 |
| 4.4 L1-ORF1P与AGOs相互作用的鉴定 | 第39页 |
| 4.5 AGO2在L1-ORF1p对L1-5'UTR启动子调控中的作用 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 6 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 附录A | 第46-47页 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第47-49页 |
| 学位论文数据集 | 第49页 |
