| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 引言 | 第11-14页 |
| 1.1.1 明串珠菌的特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 明串珠菌的糖代谢途径 | 第12-13页 |
| 1.1.3 明串珠菌的柠檬酸代谢 | 第13页 |
| 1.1.4 明串珠菌的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 双乙酰的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 双乙酰的性质 | 第14-15页 |
| 1.2.2 双乙酰的研究现状 | 第15页 |
| 1.3 牛乳中添加果汁发酵明串珠菌产双乙酰 | 第15-16页 |
| 1.3.1 牛乳成分 | 第15页 |
| 1.3.2 发酵乳的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.3 风味发酵乳的特点 | 第16页 |
| 1.4 基因敲除 | 第16-17页 |
| 1.4.1 基因敲除的定义 | 第16页 |
| 1.4.2 利用同源重组技术进行基因敲除 | 第16-17页 |
| 1.4.3 同源重组法基因失活方法和一般步骤 | 第17页 |
| 1.4.4 基因敲除技术的应用及发展前景 | 第17页 |
| 1.5 研究背景、研究内容及研究目的 | 第17-21页 |
| 1.5.1 本文的研究背景 | 第17-18页 |
| 1.5.2 本文的研究内容 | 第18页 |
| 1.5.3 本文的研究目的和意义 | 第18-21页 |
| 第二章 牛乳中添加不同果汁对明串珠菌发酵 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第21页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.4 培养基 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第22页 |
| 2.3.2 果汁的制备 | 第22-23页 |
| 2.3.3 明串珠菌的计数 | 第23页 |
| 2.3.4 双乙酰的检测 | 第23-24页 |
| 2.4 结果 | 第24-27页 |
| 2.4.1 明串珠菌在苹果汁和水中的生长 | 第24页 |
| 2.4.2 双乙酰标准曲线 | 第24页 |
| 2.4.3 牛乳与苹果汁混合液中双乙酰的量 | 第24-25页 |
| 2.4.4 牛乳-小西红柿汁混合液的发酵 | 第25页 |
| 2.4.5 牛乳-西瓜汁混合液的发酵 | 第25页 |
| 2.4.6 牛乳-草莓汁混合液的发酵 | 第25-26页 |
| 2.4.7 牛乳-菠萝汁混合液的发酵 | 第26页 |
| 2.4.8 牛乳-果汁混合液中果汁和柠檬酸的影响 | 第26-27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-29页 |
| 2.5.1 培养基对产双乙酰的影响 | 第27页 |
| 2.5.2 乳糖的利用 | 第27-28页 |
| 2.5.3 果汁的制备及灭菌 | 第28页 |
| 2.5.4 发酵剂菌株 | 第28-29页 |
| 2.5.5 五种果汁产双乙酰的比较 | 第29页 |
| 2.6 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 明串珠菌乙醇脱氢酶基因失活菌株的构建及其鉴定 | 第31-51页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31-34页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第31页 |
| 3.2.2 培养基 | 第31页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第31-33页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2.5 引物 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3.1 菌种保存与活化 | 第34页 |
| 3.3.2 明串珠菌总 DNA 的提取 | 第34-35页 |
| 3.3.3 明串珠菌感受态细胞制备及电转化 | 第35页 |
| 3.3.4 发酵液中甘露醇的检测 | 第35-36页 |
| 3.3.5 乳酸的检测 | 第36-37页 |
| 3.3.6 总酸的检测 | 第37页 |
| 3.3.7 乙醇和双乙酰的检测 | 第37页 |
| 3.4 明串珠菌 ADH 基因同源重组载体的构建 | 第37-41页 |
| 3.4.1 克隆 ADH 基因 | 第38页 |
| 3.4.2 中间载体 pTA2 Erm 的构建 | 第38-39页 |
| 3.4.3 基因失活载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.5 失活菌株的构建 | 第41页 |
| 3.5.1 将重组质粒导入明串珠菌 | 第41页 |
| 3.5.2 同源重组子的验证 | 第41页 |
| 3.6 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.6.1 明串珠菌染色体 DNA 的提取结果 | 第41-42页 |
| 3.6.2 明串珠菌 ADH 基因的分离克隆 | 第42-43页 |
| 3.6.3 重组质粒构建结果 | 第43-45页 |
| 3.6.4 失活菌株的鉴定 | 第45页 |
| 3.6.5 失活菌株和原始代谢产物的检测 | 第45-47页 |
| 3.7 讨论 | 第47-49页 |
| 3.8 小结 | 第49-51页 |
| 第四章 重铬酸钾分光光度法测定发酵液中乙醇的含量 | 第51-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株与培养基 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52页 |
| 4.2.1 制作乙醇标准液 | 第52页 |
| 4.2.2 制作含 5%重铬酸钾的反应液 | 第52页 |
| 4.2.3 发酵液中乙醇含量的测定 | 第52页 |
| 4.2.4 结果计算 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 4.3.1 制作乙醇标准曲线 | 第52-53页 |
| 4.3.2 最大吸收光谱的确定 | 第53页 |
| 4.3.3 硫酸的用量的确定 | 第53页 |
| 4.3.4 重铬酸钾用量的的确定 | 第53-54页 |
| 4.3.5 发酵液处理 | 第54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 A | 第65-67页 |
| 附录 B | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读学位期间取得的相关科研成果 | 第71页 |