| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 干旱是玉米生产的主要限制因素 | 第9页 |
| 1.2 矮沙冬青 | 第9-11页 |
| 1.2.1 矮沙冬青的抗逆生物学特性 | 第10页 |
| 1.2.2 矮沙冬青抗逆基因克隆与功能验证 | 第10-11页 |
| 1.3 液泡膜氢离子焦磷酸酶 | 第11-14页 |
| 1.3.1 液泡膜氢离子焦磷酸酶的发现 | 第11-12页 |
| 1.3.2 液泡膜氢离子焦磷酸酶的分子结构 | 第12-13页 |
| 1.3.3 液泡膜氢离子焦磷酸酶的功能 | 第13页 |
| 1.3.4 液泡膜氢离子焦磷酸酶基因的转化利用 | 第13-14页 |
| 1.4 技术路线与目的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-26页 |
| 2.1 AnVP1基因单子叶植物表达载体构建 | 第15-20页 |
| 2.1.1 目的片段扩增与回收 | 第15-16页 |
| 2.1.2 酶切与连接 | 第16-17页 |
| 2.1.3 大肠杆菌感受态细胞制备与热激转化 | 第17-18页 |
| 2.1.4 菌液PCR检测 | 第18-19页 |
| 2.1.5 质粒提取与检测 | 第19页 |
| 2.1.6 农杆菌的转化与检测 | 第19-20页 |
| 2.2 农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织 | 第20-22页 |
| 2.2.1 培养基配方 | 第20-21页 |
| 2.2.2 愈伤组织培养与转化 | 第21页 |
| 2.2.3 愈伤组织的筛选与再生 | 第21-22页 |
| 2.3 T_0和T_1代的检测与筛选 | 第22-23页 |
| 2.3.1 基因组DNA提取 | 第22页 |
| 2.3.2 T_0代单株的PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.3.3 T_1代田间抗性筛选和PCR检测 | 第23页 |
| 2.4 AnVP1基因的表达检测 | 第23-25页 |
| 2.4.1 胁迫处理和总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.4.2 反转录合成cDNA | 第24页 |
| 2.4.3 实时定量PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.5 T_2代株系的表型观察 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-37页 |
| 3.1 AnVP1基因单子叶植物表达载体 | 第26-29页 |
| 3.1.1 AnVP1基因、Ubiquitin目启动子和T-nos终止子 | 第26页 |
| 3.1.2 表达载体pZZ00026-Ubi-An VP1-T-nos | 第26-29页 |
| 3.1.3 重组农杆菌菌株 | 第29页 |
| 3.2 转基因株系 | 第29-33页 |
| 3.2.1 抗性愈伤组织与再生苗 | 第30页 |
| 3.2.2 T_0代植株 | 第30-32页 |
| 3.2.3 T_1代株系 | 第32-33页 |
| 3.3 AnVP1基因的过量表达 | 第33-35页 |
| 3.3.1 总RNA样品质量 | 第33-34页 |
| 3.3.2 引物特异性 | 第34页 |
| 3.3.3 标准曲线 | 第34-35页 |
| 3.3.4 AnVP1基因的过量表达 | 第35页 |
| 3.4 转基因株系的抗性表型 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 4.1 不同转化事件间AnVP1基因的表达差异 | 第37页 |
| 4.2 矮沙冬青AnVP1基因与玉米中ZmVPP1基因的比较 | 第37-38页 |
| 5 应用前景 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
