中文摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
英文缩略词 | 第13-14页 |
第1章 引言 | 第14-15页 |
第2章 文献综述 | 第15-22页 |
2.1 慢性粒细胞白血病的国内外研究和治疗现状 | 第15页 |
2.2 成纤维细胞生长因子及其受体 | 第15-16页 |
2.3 FGFR3 基因的发现及国内外研究现状 | 第16页 |
2.4 FGFR3 基因及其蛋白的结构和功能 | 第16-17页 |
2.5 FGFR3 与肿瘤 | 第17-18页 |
2.6 FGFR3 与白血病 | 第18-19页 |
2.7 伊马替尼(Imatinib) | 第19-22页 |
第3章 实验材料和方法 | 第22-50页 |
3.1 主要生化和分子生物学试剂 | 第22-24页 |
3.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
3.3 主要溶液的配制 | 第25-28页 |
3.4 FGFR3 表达载体的建立 | 第28-39页 |
3.4.1 MSCV/Puromycin-FGFR3-WT 真核表达载体构建 | 第29-34页 |
3.4.2 MSCV/Puromycin-FGFR3-DN 真核表达载体构建 | 第34-39页 |
3.5 FGFR3 质粒的扩增 | 第39-40页 |
3.6 FGFR3 真核表达质粒的转染 | 第40-41页 |
3.7 Western blotting 检测 FGFR3 蛋白表达 | 第41页 |
3.8 流式细胞仪检测 FGFR3 蛋白表达 | 第41页 |
3.9 稳定转染 | 第41-43页 |
3.10 表达 WT-FGFR3 和 DN-FGFR3 K562 细胞系的建立 | 第43-48页 |
3.10.1 Western blot 方法检测 FGFR3 的表达情况 | 第43-44页 |
3.10.2 蛋白定量(Thermo BCA 蛋白定量分析试剂盒) | 第44-45页 |
3.10.3 SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第45-46页 |
3.10.4 转膜 | 第46-47页 |
3.10.5 免疫反应 | 第47页 |
3.10.6 发光鉴定 | 第47-48页 |
3.11. CCK8 方法检测稳定转染 FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 的 K562 细胞增殖情况 | 第48页 |
3.12. FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 对 K562 细胞克隆形成能力(CFU)检测 | 第48-49页 |
3.13. 统计学处理 | 第49-50页 |
第4章 实验结果 | 第50-59页 |
4.1 fgfr3-WT 和 fgfr3-DN 基因的扩增 | 第50页 |
4.2 MSCV/puro-fgfr3-WT 和 MSCV/puro-fgfr3-DN 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第50-51页 |
4.3 MSCV/puro-fgfr3-WT 重组质粒的酶切鉴定 | 第51-52页 |
4.4 FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 基因的序列测定 | 第52-55页 |
4.5 验证 K562 细胞系中转染 FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 基因的作用 | 第55-59页 |
4.5.1 验证 K562 细胞系中 FGFR3 基因的表达 | 第55-56页 |
4.5.2 CCK8 检测 FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 转染 K562 细胞增殖情况,及给予 FGFR3 抑制剂 PD173074 效果检测 | 第56-57页 |
4.5.3 稳定转染 FGFR3-WT 和 FGFR3-DN 对 K562 细胞克隆形成能力的影响 | 第57-59页 |
第5章 讨论 | 第59-61页 |
第6章 结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-71页 |
作者简介及在校期间科研成果 | 第71-72页 |
致谢 | 第72页 |