| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| 1.1 活性氧的产生及消除机制 | 第9-12页 |
| 1.1.1 活性氧的产生及危害 | 第9页 |
| 1.1.2 生物逆境对植物的损伤 | 第9-11页 |
| 1.1.2.1 干旱胁迫对植物生长的影响 | 第10页 |
| 1.1.2.2 盐胁迫对植物生长的影响 | 第10页 |
| 1.1.2.3 氧化胁迫对植物生长的影响 | 第10-11页 |
| 1.1.3 活性氧消除机制 | 第11页 |
| 1.1.4 H_2O_2的生理功能 | 第11-12页 |
| 1.2 抗坏血酸过氧化物酶 | 第12-14页 |
| 1.2.1 抗坏血酸过氧化物酶简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 APX对H_2O_2的清除作用 | 第13-14页 |
| 1.3 APX的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第15-17页 |
| 2 过表达毛白杨APX转基因烟草植株的培育 | 第17-23页 |
| 2.1. 农杆菌介导法转化烟草 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第17-18页 |
| 2.1.2.1 烟草叶片的抗敏感试验 | 第17页 |
| 2.1.2.2 侵染用根癌农杆菌菌液的制备 | 第17-18页 |
| 2.1.2.3 烟草叶片预培养 | 第18页 |
| 2.1.2.4 根癌农杆菌侵染烟草叶片及叶片培养 | 第18页 |
| 2.1.2.5 生根及继代培养 | 第18页 |
| 2.1.3 结果与分析 | 第18页 |
| 2.2 过表达毛白杨APX转基因烟草的分子检测 | 第18-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.2.1 CTAB法提取植物基因组DNA | 第19页 |
| 2.2.2.2 转基因烟草PCR检测 | 第19-20页 |
| 2.2.2.3 转基因烟草Southern blotting检测 | 第20-21页 |
| 2.2.3 结果与分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3.1 转基因烟草PCR检测结果 | 第21-22页 |
| 2.2.3.2 转基因烟草Southern blotting检测结果 | 第22页 |
| 2.3 小结 | 第22-23页 |
| 3 转基因烟草植株逆境生长的形态变化和生理反应 | 第23-36页 |
| 3.1 胁迫处理 | 第23-24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第23页 |
| 3.1.3 结果与分析 | 第23-24页 |
| 3.2 转线粒体APX基因烟草逆境抗性测定 | 第24-31页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 3.2.2.1 相对含水量测定 | 第24页 |
| 3.2.2.2 叶绿素含量测定 | 第24-25页 |
| 3.2.2.3 丙二醛含量测定 | 第25页 |
| 3.2.2.4 可溶性总蛋白含量测定 | 第25页 |
| 3.2.2.5 APX酶活性测定 | 第25页 |
| 3.2.2.6 SOD酶活性测定 | 第25-26页 |
| 3.2.2.7 AsA含量测定 | 第26页 |
| 3.2.2.8 H_2O_2含量测定 | 第26-27页 |
| 3.2.2.9 NADP/NADPH比值测定 | 第27页 |
| 3.2.3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 3.2.3.1 干旱胁迫 | 第27-29页 |
| 3.2.3.2 盐胁迫 | 第29-30页 |
| 3.2.3.3 氧化胁迫 | 第30-31页 |
| 3.3 转细胞质APX基因烟草逆境抗性测定 | 第31-34页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第31-32页 |
| 3.3.2.1 相对含水量测定 | 第31页 |
| 3.3.2.2 叶绿素含量测定 | 第31页 |
| 3.3.2.3 丙二醛含量测定 | 第31页 |
| 3.3.2.4 可溶性总蛋白含量测定 | 第31页 |
| 3.3.2.5 APX酶活性测定 | 第31页 |
| 3.3.2.6 SOD酶活性测定 | 第31页 |
| 3.3.2.7 AsA含量测定 | 第31-32页 |
| 3.3.2.8 H_2O_2含量测定 | 第32页 |
| 3.3.2.9 NADP/NADPH量测定 | 第32页 |
| 3.3.3 结果与分析 | 第32-34页 |
| 3.3.3.1 干旱胁迫 | 第32-33页 |
| 3.3.3.2 盐胁迫 | 第33-34页 |
| 3.3.3.3 氧化胁迫 | 第34页 |
| 3.4 小结 | 第34-36页 |
| 4 拟南芥突变体回复突变 | 第36-50页 |
| 4.1 载体的构建 | 第36-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第36-41页 |
| 4.1.2.1 引物设计 | 第36-37页 |
| 4.1.2.2 启动子、终止子和APX基因的PCR扩增及测序 | 第37页 |
| 4.1.2.3 PCR扩增产物的回收 | 第37页 |
| 4.1.2.4 PCR产物加尾并与pMD18-T载体连接 | 第37页 |
| 4.1.2.5 连接产物转化大肠杆菌JM109 | 第37页 |
| 4.1.2.6 转化结果的鉴定及测序 | 第37-38页 |
| 4.1.2.7 pCAMBIA1301载体构建及与APX基因连接 | 第38-41页 |
| 4.1.3 结果与分析 | 第41-46页 |
| 4.1.3.1 添加双酶切位点的启动子和终止子测序结果 | 第41-42页 |
| 4.1.3.2 pCAMBIA1301、终止子-T、启动子-T双酶切 | 第42-43页 |
| 4.1.3.3 pCAMBIA1301-p-t载体构建鉴定 | 第43页 |
| 4.1.3.4 添加双酶切位点的APX基因测序结果 | 第43-44页 |
| 4.1.3.5 pCAMBIA1301-p-t、APX片段双酶切 | 第44-45页 |
| 4.1.3.6 pCAMBIA1301-APX载体鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2 拟南芥突变体鉴定 | 第46-48页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 4.2.2.1 引物设计 | 第46页 |
| 4.2.2.2 拟南芥播种及总DNA提取 | 第46-47页 |
| 4.2.2.3 PCR鉴定纯合体及表型观察 | 第47页 |
| 4.2.3 结果与分析 | 第47-48页 |
| 4.2.3.1 纯合体鉴定结果 | 第47-48页 |
| 4.2.3.2 纯合体表型分析 | 第48页 |
| 4.4 小结 | 第48-50页 |
| 5 结果与讨论 | 第50-52页 |
| 5.1 结论 | 第50页 |
| 5.2 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 个人简介 | 第57-58页 |
| 导师简介 | 第58-59页 |
| 获得成果目录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
